FHL2基因在雞骨骼肌衛(wèi)星細胞增殖與分化中的作用研究.pdf

1、FHL2(Four and a Half LIM protein2)屬于FHL蛋白家族的成員，是一種只含有四個半LIM結(jié)構(gòu)域的蛋白質(zhì)。已有研究表明，F(xiàn)HL2直接或間接參與調(diào)控衛(wèi)星細胞增值與分化相關(guān)重要通路（Wnt/β-catenin、TGFβ）的信號轉(zhuǎn)導過程，且該基因在雞出生后不同階段的胸肌中表達呈現(xiàn)顯著差異，推測FHL2基因可能為調(diào)控雞骨骼肌衛(wèi)星細胞增殖分化的重要因子。因此，本研究通過對體外培養(yǎng)的原代雞胸肌衛(wèi)星細胞進行FHL2 SiR

2、NA的轉(zhuǎn)染處理，觀察對轉(zhuǎn)染不同時間點(12h、24h、48h和72h)的肌衛(wèi)星細胞增殖與分化形態(tài)，并通過RT-PCR技術(shù)檢測轉(zhuǎn)染后(12h、24h和48h)相關(guān)成肌調(diào)節(jié)因子以及Wnt/β-catenin、TGFβ、Notch三條重要信號轉(zhuǎn)導通路中關(guān)鍵基因的mRNA表達，以及采用Western-Blot檢測了FHL2、MYH7B以及NUMB蛋白在轉(zhuǎn)染后(24h、48h和72h)的蛋白表達情況。結(jié)果表明:
　　(1)細胞形態(tài)學變化:轉(zhuǎn)

3、染后12h，三個試驗組細胞在形態(tài)學上沒有明顯的差異;24h后，處理組的衛(wèi)星細胞數(shù)量明顯少于兩個對照組，對照組細胞極少部分出現(xiàn)分化;48h后，兩個對照組細胞長滿且大量分化，而處理組細胞少量增殖且僅有極少數(shù)細胞開始分化;72h后，兩個對照組完全分化且出現(xiàn)肌管，而處理組的細胞數(shù)量無明顯變化，部分細胞開始分化，但無肌管出現(xiàn)。
　　(2)成肌調(diào)節(jié)因子的mRNA表達:在轉(zhuǎn)染12h和24h后，處理組中FHL2的mRNA表達顯著低于兩個對照組(P

4、＜0.05);轉(zhuǎn)染后12h，處理組中成肌調(diào)節(jié)因子MyoD和MyoG的mRNA表達量顯著低于兩個對照組(P＜0.05);轉(zhuǎn)染后24h，處理組中MyoG和MYHC的mRNA表達量顯著低于兩個對照組(P＜0.05);三個試驗組中MRF4的表達量在轉(zhuǎn)染后的三個時間點均差異不顯著(P＞0.05)
　　(3) Notch信號通路:轉(zhuǎn)染12h后，處理組中hairy1的mRNA表達量顯著低于空白對照組和陰性對照組(P＜0.05);轉(zhuǎn)染24h后，處

5、理組中Notch2、Hey1以及hairy1的mRNA表達量顯著或極顯著低于對照組(P＜0.05或P＜0.01);轉(zhuǎn)染48h后，處理組中NUMB的mRNA表達量極顯著低于另兩個組(P＜0.01);
　　(4) TGFβ信號通路:關(guān)鍵基因ACVR1的mRNA表達量在轉(zhuǎn)染12h時處理組顯著低于兩個對照組(P＜0.05);ACVR2的mRNA表達量則在轉(zhuǎn)染后三個時間點中均為處理組顯著低于兩個對照組(P＜0.05);
　　(5) W

6、nt/β-catenin信號通路:轉(zhuǎn)染12h后，處理組中β-catenin、Wnt2b以及Wnt4的mRNA表達量顯著或極顯著低于對照組(P＜0.05或P＜0.01);轉(zhuǎn)染24h后，處理組中Wnt4和Wnt6的mRNA表達量極顯著低于對照組(P＜0.01);轉(zhuǎn)染48h后，處理組中GSK3β和Wnt5a的mRNA表達量極顯著低于對照組(P＜0.01)。
　　(6) Western-Blot檢測表明:轉(zhuǎn)染48h后，處理組中FHL2蛋白

7、和MYH7B蛋白的表達量明顯低于空白對照組和陰性對照組;在轉(zhuǎn)染72h后，處理組中NUMB蛋白的表達量明顯低于兩個對照組。
　　綜上，轉(zhuǎn)染FHL2 SiRNA后，雞骨骼肌衛(wèi)星細胞的增殖和分化均受到明顯的抑制，F(xiàn)HL2的表達量降低下調(diào)部分成肌因子的表達，Wnt/β-catenin、TGFβ、Notch三條通路的信號轉(zhuǎn)導也受到不同程度的抑制。因此，本研究推測FHL2基因可能通過Wnt/β-catenin、TGFβ、Notch三條通路的信