Ad-Egr-hTrail的輻射誘導(dǎo)特性及其對(duì)膠質(zhì)瘤細(xì)胞殺傷作用的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的:在以腺病毒重組載體Ad-CMV-hTrail作為對(duì)照基礎(chǔ)上，研究Ad-Egr-hTrail的輻射誘導(dǎo)特性及其聯(lián)合放射線對(duì)膠質(zhì)瘤細(xì)胞的殺傷作用。 方法:將Ad-Egr-hTrail和Ad-CMV-hTrail分別在AE25crma細(xì)胞中進(jìn)行大量擴(kuò)增，將擴(kuò)增鑒定成功的重組腺病毒以MOI=100感染U251細(xì)胞，病毒感染48h后給予γ射線照射。實(shí)驗(yàn)分6組：空白對(duì)照組(A組)，Ad-Egr-hTrail+0Gy組(B組)，Ad-C

2、MV-hTrail+0Gy組(C組)，單純12Gy組(D組)，Ad-Egr-hTrail+12Gy組(E組)，Ad-CMV-hTrail+12Gy組(F組)。real-time quanitative-PCR法測(cè)定不同組別腫瘤細(xì)胞Trail mRNA表達(dá)水平；Western Blot檢測(cè)Trail基因蛋白的表達(dá)水平；MTS法測(cè)定腫瘤細(xì)胞的抑制率。 結(jié)果 1.B、C、D、E、F組的Trail mRNA相對(duì)表達(dá)水平分別為：6

3、.23，42.68，1.43，48.84，56.72；Ad-Egr-hTrail+12Gy組Trail mRNA表達(dá)水平是單純Ad-Egr-hTrail組7.84倍，而Ad-CMV-hTrail+12Gy組Trail mRNA表達(dá)水平是單純Ad-CMV-hTrail組1.33倍。 2.Ad-Egr-hTrail+12Gy組Trail蛋白較單純Ad-Egr-hTrail組表達(dá)明顯增加，而Ad-CMV-hTrail+12Gy組Tra

4、il蛋白表達(dá)與單純Ad-CMV-hTrail組相比無(wú)明顯變化。 3.腺病毒重組載體聯(lián)合放射線對(duì)腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞殺傷作用：(1)B、C、D、E、F組的抑制率分別為：5.49％、24.61％、29.55％、40.77％、45.15％，B組與A組相比無(wú)明顯的差異(P>0.05)，其余各實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組相比均有顯著性差異(P<0.01)；(2)兩種腺病毒重組載體單獨(dú)使用時(shí)，C組的抑制率明顯高于B組(P<0.01)，兩者聯(lián)合放療時(shí)，抑制率均明顯

5、提高(P<0.01)，E組是B組的7.43倍，F(xiàn)組是C組的1.84倍；(3)與D組相比，E組、F組的抑制率明顯提高(P<0.01)，E組的放療增敏比為1.38倍，F(xiàn)組的放療增敏比為1.53倍。 結(jié)論 1.腺病毒重組載體Ad-Egr-hTrail具有較強(qiáng)輻射誘導(dǎo)特性； 2.腺病毒重組載體Ad-CMV-hTrail不具有輻射誘導(dǎo)特性； 3.Trail基因可能具有輻射增敏作用； 4.攜帶Trail基因腺