miR-145對HepG2干細胞增殖的影響.pdf

1、目的：肝癌發(fā)生發(fā)展是多因素、多步驟綜合作用的結果，它是一個復雜的多基因疾病已成為共識。而作為目前生命科學研究熱點的microRNA(miRNA)，由于其在肝癌發(fā)生中具有癌基因及抑癌基因的雙重作用，亦受到廣泛關注。既往研究表明，miR-145是一種潛在的肝癌“保護性”miRNA，本研究旨在探討HepG2細胞中miR-145與肝癌干細胞之間的關系及可能的分子機制，以闡明miRNA調控細胞增殖的可能作用機制，揭示肝癌細胞生長的規(guī)律，為肝癌的治

2、療探索一條新的思路。
　　方法：
　?。?）按常規(guī)培養(yǎng)方法，體外培養(yǎng)HepG2細胞，選取處于對數(shù)生長期的細胞為實驗細胞，接種于細胞培養(yǎng)板或培養(yǎng)瓶中，待細胞均貼壁完全后，棄去廢棄培養(yǎng)液。
　?。?）分別以siRNA-NC-FAM和shRNA-GFP為轉染物，以脂質體Lipofectamine2000為轉染試劑，倒置熒光顯微鏡下觀察轉染效率，進行轉染效率評價。
　?。?）本實驗擬分為以下四組，分別為：miR-145模

3、擬物轉染組，模擬物陰性對照轉染組，只加轉染試劑的對照組以及不做任何處理的空白對照組，根據(jù)人源miR-145-5p的基因序列,設計并合成雙鏈模擬物（miR-145-5p mimics）。將miR-145-5pmimics以脂質體Lipofectamine2000包裹，并轉染至HepG2細胞株中。
　?。?）實時定量PCR法檢測miR-145-5p的表達水平。
　?。?）轉染后48小時，Western blot方法檢測細胞內目標

4、基因OCT4蛋白表達水平。
　?。?）細胞增殖實驗CCK-8法檢測miR-145-5p對HepG2細胞株在不同時間段(24小時、48小時、72小時)生長的作用。
　?。?）實時定量PCR檢測干細胞標志物CD90 mRNA表達的變化。
　　結果：
　　（1）用中劑量的siRNA oligo轉染HepG2細胞效果較好；
　　（2）與各實驗對照組相比，miR-145-5p模擬物轉染組的miR-145表達明顯上調；