愛普列特治療老齡大鼠前列腺增生癥作用機制的初步研究.pdf

1、目的： 研究愛普列特作用后，老年大鼠5α-還原酶mRNA表達的變化及其對微血管，細胞凋亡等方面的作用，評價新型5α-還原酶抑制劑愛普列特對老齡大鼠前列腺組織的影響，重點探討5α-還原酶抑制劑對治療良性前列腺增生癥的作用機制，為治療前列腺增生癥的藥物選擇提供理論基礎(chǔ)。 方法： 1.選取清潔級實驗動物70只雄性15月齡老年SD大鼠，體重540±20g，均由浙江省實驗動物中心提供，所有動物為SPF級動物。將老齡SD大鼠

2、分為四組：大劑量組(A組)：SD大鼠20只，灌胃口服愛普列特片(3mg.kg-1.d-1)4周；小劑量組(B組)：SD大鼠20只，灌胃口服愛普列特片(Img.kg-1.d-1)4周；藥物對照組(C組)：SD大鼠20只，灌胃口服保列治片(1mg.kg-1.d-1)4周；空白對照組(D組)：SD大鼠10只，灌胃口服生理鹽水4周。 2.5α-還原酶mRNA檢測：通過熒光定量PCR法檢測前列腺組織中5α-還原酶mRNA相對表達量，觀察不

3、同類型的5α-還原酶抑制劑對5α-還原酶mRNA表達的作用。 3.細胞凋亡蛋白檢測：免疫組化法檢測前列腺組織中Bax，Bcl-2蛋白表達，觀察5α-還原酶抑制劑作用前后細胞凋亡蛋白表達量的改變。 4.微血管相關(guān)蛋白測定：免疫組化法檢測前列腺組織中eNOS蛋白表達，觀察用前列腺組織在用藥前后微血管生長相關(guān)蛋白表達的變化。 5.前列腺組織微血管密度測定：CD34蛋白表達于前列腺組織中微血管內(nèi)皮，經(jīng)免疫組化染色后，鏡下

4、計算每視野下微血管數(shù)目，觀察前列腺組織在藥物作用前后微血管密度的變化。 6.統(tǒng)計學(xué)處理：采用SPSS11.5統(tǒng)計學(xué)軟件，將所得計量數(shù)據(jù)采用one-way ANOVA，顯著性水平P<0.05。 結(jié)果： 1.各實驗組5α-還原酶mRNA表達變化： 用實時熒光定量PCR檢測前列腺組織中1型5α-還原酶mRNA與2型5α-還原酶mRNA表達，實驗結(jié)果顯示：藥物治療組中1型5α-還原酶mRNA(A組，B組與C組)與

5、正常組(D組)之間的表達量無明顯差異(11.49±1.487，45±2.31，vs11.21±1.75，P>0.05)，同樣，2型5α-還原酶mRNA(A組，B組與C組)與正常組(D組)之間的表達量也無明顯差異(6.32±0.84，7.03±0.67vs6.82±0.45，P0.05)，表明老齡大鼠經(jīng)短期小劑量的5α還原酶抑制劑(愛普列特)治療后，其前列腺組織中5α還原酶mRNA的表達量并未發(fā)生明顯變化，可推測短期小劑量的5α還原酶抑制

6、劑(愛普列特)只能通過抑制5α還原酶的活性以減少睪酮向雙氫睪酮的轉(zhuǎn)化來減小前列腺的體積，而不是抑制5α還原酶mRNA表達量減少。 2.細胞凋亡蛋白Bcl-2和Bax蛋白表達變化： 利用免疫組化法檢測前列腺組織中Bcl-2和Bax蛋白表達，結(jié)果顯示：與正常組(D組)相比，各用藥組(A組、B組和C組)Bcl-2蛋白表達量明下降(P<0.05)，而Bax蛋白表達升高(P<0.05)。因此，Bax/Bcl-2比值升高(P<0.0

7、5).以上結(jié)果表明，5α還原酶抑制劑(愛普列特)對老齡大鼠前列腺增生組織中凋亡蛋白的表達有明顯的作用，可能呈劑量依賴性，但由于實驗組間愛普列特灌服劑量差異較小，凋亡蛋白表達在大小劑量組之間雖然有部分差異，但不具有統(tǒng)計學(xué)意義。 3.各實驗組微血管密度和eNOS蛋白變化的比較結(jié)果：免疫組化法檢測前列腺組織中CD34的表達，同時計算前列腺組織中微血管密度(MVD)，發(fā)現(xiàn)用藥組(A組、B組和C組)的MVD值明顯低于正常組(D組)(4.3

8、5±2.20，6.25±1.29，4.90±1.29vs8.00±2.98，P<0.05)，而且愛普列特大劑量組(A組)的MVD值明顯低于愛普列特小劑量組(B組)(4.35±2.20vs6.25±1.29，P<0.05)；在對微血管生長相關(guān)蛋白eNOS檢測中發(fā)現(xiàn)A、B、C組eNOS蛋白表達量明顯低于D組(72.27±48.50，163.89±91.40，144.82±80.78vs293.58±116.0，P<0.05)，A組明顯低于B

9、組(72.27±48.50vs163.89±91.40，P<0.05)。表明愛普列特對微血管生長有明顯抑制作用，并呈現(xiàn)劑量依賴性。 結(jié)論： 1.愛普列特可能對前列腺增生組織中5α還原酶mRNA的表達無明顯影響。 2.愛普列特可以顯著上調(diào)大鼠前列腺組織中凋亡促進蛋白Bax的表達，下調(diào)凋亡抑制蛋白Bcl-2的表達，促進前列腺增生組織細胞凋亡的發(fā)生。 3.愛普列特對前列腺增生組織eNOS蛋白表達也有顯著抑制性作