大蒜素誘導(dǎo)人卵巢癌細(xì)胞SKOV3凋亡機(jī)制研究.pdf

1、研究目的：
　　 大蒜素是從大蒜中分離提取的一種重要成分，以往的研究顯示，大蒜素可顯著抑制卵巢癌細(xì)胞H08910和OVCA-3的生長(zhǎng)，并誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。然而，大蒜素誘導(dǎo)卵巢癌細(xì)胞凋亡的機(jī)制并不十分清楚。本研究以人卵巢癌SKOV3細(xì)胞為實(shí)驗(yàn)對(duì)象，闡明大蒜素誘導(dǎo)卵巢癌細(xì)胞凋亡的作用機(jī)制。
　　 主要方法：
　　 采用CCK-8法測(cè)定大蒜素對(duì)SKOV3細(xì)胞增殖活性的效應(yīng)；AnnexinV-FITC/PI雙染法流式細(xì)胞術(shù)(

2、FCM)檢測(cè)凋亡率的變化；FCM檢測(cè)細(xì)胞周期分布；磷酸化蛋白激酶芯片檢測(cè)信號(hào)通路的活化情況，由免疫印跡實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步證實(shí)。
　　 主要結(jié)果：
　　 (1)不同濃度大蒜素作用不同時(shí)間對(duì)SKOV3細(xì)胞的增殖抑制作用：CCK-8法檢測(cè)結(jié)果顯示一定濃度范圍的大蒜素對(duì)SKOV3細(xì)胞的生長(zhǎng)具有明顯的抑制作用，且呈時(shí)間-劑量依賴性。不同濃度組分別作用于SKOV3細(xì)胞24、48、72h，其抑制率差異有顯著性意義(P<0.05)。利用中效方程

3、得出，48h的IC50為22.23μg/m。
　　 (2)大蒜素對(duì)SKOV3細(xì)胞周期的影響：12.5μg/ml、25μg/ml濃度大蒜素作用SKOV3細(xì)胞48h后，細(xì)胞周期發(fā)生變化。各實(shí)驗(yàn)組G1期細(xì)胞百分比降低，S期細(xì)胞百分比無(wú)明顯變化，G2期細(xì)胞百分比增高，細(xì)胞顯著阻滯于G2期，與對(duì)照組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。
　　 (3)大蒜素對(duì)SKOV3細(xì)胞凋亡的影響：12.5μg/ml、25μg/ml濃度大蒜素作用48

4、h后細(xì)胞凋亡率隨著藥物濃度的增加而增加，早晚期凋亡率(％)分別為7.37±1.21、15.87±1.65，與對(duì)照組(2.33±0.42)比較均明顯提高(P<0.01)；加入JNK信號(hào)通路抑制劑(SP600125)20μM作用15min后，凋亡率明顯減低(P<0.01)。
　　 (4)磷酸化蛋白激酶芯片對(duì)大蒜素激活的信號(hào)通路的篩選：12.5μg/ml的大蒜素作用24h后，磷酸化蛋白激酶芯片結(jié)果顯示，P53(S46)、AKT(T30

5、8)和]c-Jun(S63)等信號(hào)通路被激活。
　　 (5)大蒜素對(duì)JNK通路激活的影響：(0-100μg/ml)的大蒜素作用15min后，JNK蛋白的磷酸化隨著濃度的增加明顯增加；25μg/ml的大蒜素作用不同時(shí)間后，JNK的磷酸化在15min最強(qiáng)；加入SP600125后JNK的磷酸化明顯受到抑制。表明大蒜素誘導(dǎo)SKOV3細(xì)胞凋亡與JNK通路有關(guān)。
　　 (6)大蒜素對(duì)線粒體凋亡通路的影響：25μg/ml的大蒜素作用S

6、KOV3細(xì)胞(0、6h、12h)后，在胞漿蛋白中，Bax蛋白的表達(dá)量明顯減弱，CytC蛋白的表達(dá)則顯著增強(qiáng)；而線粒體Bax、CytC蛋白表達(dá)正好相反。加入SP600125后，在胞漿蛋白中，Bax蛋白的表達(dá)增加，CytC蛋白的表達(dá)減弱；而線粒體蛋白表達(dá)正好相反。表明JNK的活化，包括Bcl-2家族的活化，引發(fā)了線粒體介導(dǎo)的凋亡信號(hào)通路的活化，導(dǎo)致Bax遷移后的大量堆積和CytC的釋放，導(dǎo)致卵巢癌SKOV3細(xì)胞凋亡。
　　 結(jié)論：<