Babesia gibsoni AMA-1基因的克隆和表達及其血清學診斷上的研究.pdf

1、本文通過B.gibsoni感染狗血清對由B.gibsoni裂殖子構建的cDNA基因表達文庫進行免疫篩選，其中獲得的27個陽性克隆是編碼同一蛋白的cDNA。經(jīng)過核苷酸序列分析，發(fā)現(xiàn)這些cDNA不完整，缺乏5′端的基因。于是，采用PCR方法從cDNA文庫擴增含5′端的cDNA。獲得完整的基因序列后，通過計算機分析，顯示，整個基因長度是2，108bp，其中包括一個長度為1，764bp的開放閱讀框架，編碼分子量約為62kDa大小的一條多肽鏈。通

2、過BLAST，提交至GenBank數(shù)據(jù)庫進行比較，顯示這條多肽鏈與已報道的AMA-1有同源性，特別是與BabesiabovisAMA-1(BbAMA-1)同源性高達53﹪，我們因此把這條多肽命名為BabesiagibsoniAMA-1(BgAMA-1)。為了進一步研究BgAMA-1，構建了BgAMA-1基因的重組表達質粒，并在大腸桿菌BL21中以GST-BgAMA-1融合蛋白形式進行表達，結果顯示：GST蛋白(空白對照)和重組融合蛋白G

3、ST-BgAMA-1的大小與預期的相符，分別為26kDa和88kDa。Westernblot分析表明，重組抗原BgAMA-1能特異性吸附B.gibsoni感染犬血清中的某種抗體，呈現(xiàn)特有的反應帶，而相應的對照組GST無特異性反應出現(xiàn)。初步推斷，BgAMA-1為B.gibsoni所特有的抗原。以重組蛋白BgAMA-1作為診斷抗原的ELISA試驗中，能區(qū)分B.gibsoni感染犬血清和SPF犬血清，且與其他Babesia屬沒有出現(xiàn)交叉反應現(xiàn)