嗜肺軍團(tuán)菌巨噬細(xì)胞感染增強(qiáng)蛋白的表達(dá)和純化及其在血清學(xué)診斷中的應(yīng)用.pdf

1、目的：表達(dá)和純化出嗜肺軍團(tuán)菌巨噬細(xì)胞感染增強(qiáng)蛋白(macrophageinfectivitypotentiator,MIP),研究其在軍團(tuán)菌肺炎血清學(xué)診斷中應(yīng)用價(jià)值。
　　方法：將已構(gòu)建成功的重組質(zhì)粒pET-mip轉(zhuǎn)化E.coliBL21感受態(tài)細(xì)胞中,誘導(dǎo)MIP蛋白表達(dá),運(yùn)用SDS-PAGE電泳分析和親和層析法純化。用純化的MIP蛋白作為包被抗原建立間接ELISA法,同時(shí)DRG的軍團(tuán)菌IgG/IgM/IgA試劑盒和R&D的ELIS

2、AIgG、IgM、IgA試劑盒分別檢測(cè)血清中的嗜肺軍團(tuán)菌特異性IgG、IgM、IgA抗體,然后對(duì)這兩種方法進(jìn)行比較,通過(guò)敏感性、特異性以及不同檢測(cè)結(jié)果的一致性,來(lái)評(píng)價(jià)該方法的應(yīng)用價(jià)值。
　　結(jié)果：誘導(dǎo)相對(duì)分子質(zhì)量(Mr)大約40000的MIP融合蛋白在E.coliBL21中表達(dá)并純化。用以純化蛋白作為包被抗原建立的間接ELISA檢測(cè)方法分別檢測(cè)血清中嗜肺軍團(tuán)菌特異性IgG、IgM、IgA抗體。與DRGIgG/M/A試劑盒比較:靈敏

3、度90.9％,特異度92.8%,一致性Kappa值0.837(P<0.05),ROC曲線下面積0.911。與ELISA試劑盒(R&D)進(jìn)行比較:IgG抗體的靈敏度88.5%,特異度95.5%,一致性Kappa值0.846(P<0.05),ROC曲線下面積0.927。IgM抗體的靈敏度89.3%,特異度97.6%,一致性Kappa值0.88(P<0.05),ROC曲線下面積0.947。IgA抗體的靈敏度90%,特異度95%,一致性Kapp