基底拉伸和壓縮加載對肝癌細胞接觸抑制喪失生長行為的影響.pdf

1、 基底拉伸和壓縮加載對肝癌細胞 接觸抑制喪失生長行為的影響 重慶大學(xué)碩士學(xué)位論文 學(xué)生姓名： 指導(dǎo)教師： 專 業(yè)：細胞生物學(xué) 學(xué)科門類：生物工程 重慶大學(xué)生物工程學(xué)院 二 OO 八年四月 重慶大學(xué)碩士學(xué)位論文 中文摘要 I 摘 要 肝癌細胞在體外二維培養(yǎng)中存在明顯的接觸抑制喪失現(xiàn)象，突出表現(xiàn)為細胞惡性增殖行為。細胞接觸抑制生長屬細胞

2、相互作用導(dǎo)致的社會行為，而超越單個細胞界線并把群體細胞聯(lián)系在一起的大骨架網(wǎng)絡(luò)體系，與細胞社會行為及其調(diào)控密切相關(guān)。其中，以大骨架網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)為載體的預(yù)張力對細胞生長增殖等生命活動具有直接的調(diào)控作用。腫瘤細胞骨架結(jié)構(gòu)存在缺陷，由此引起的預(yù)張力調(diào)節(jié)異常與腫瘤細胞接觸抑制喪失是否則相關(guān)，本文通過力學(xué)加載手段對肝癌細胞生長基底進行拉伸與收縮刺激，觀測細胞骨架預(yù)張力變化對細胞連結(jié)及細胞增殖的影響研究結(jié)果對揭示腫瘤細胞接觸抑制喪失成因具有一定意義。 目

3、的 通過對肝細胞與肝癌細胞 E 鈣粘素分布、 表達和運動生長行為與其連結(jié)狀態(tài)和骨架預(yù)張力狀態(tài)相關(guān)關(guān)系的研究，探索肝癌細胞接觸抑制喪失機制。 方法 運用顯微形態(tài)學(xué)，圖像分析軟件，免疫熒光染色，激光共聚焦顯微成像技術(shù)等研究手段，分別對不同生長密度的肝癌細胞和肝細胞形態(tài)特征、細胞骨架變化和運動變形能力，以及 E 鈣粘素表達和分布變化進行檢測和定量分析。通過細胞同步化，MTT 和流式細胞儀等實驗技術(shù)分別對機械拉伸和收縮刺激后肝癌細胞細胞骨架變化

4、和增殖進行檢測和定量分析。 結(jié)果 1）肝細胞和肝癌細胞 102、104 生長密度，肝癌中 E 鈣粘素平均表達量（77.43± 5.77，76.06± 5.61）顯著高于肝細胞（15.81± 2.23，16.96± 1.12） ，p<0.05；E鈣粘素分布特征為：肝細胞 E 鈣粘素主要沿細胞膜呈散點狀分布，肝癌細胞中則呈彌散狀分布；兩種細胞運動遷移狀態(tài)無明顯差異，均表現(xiàn)為運動速率較高、軌跡離散

5、等特征；MTT 檢測肝細胞和肝癌細胞的生長曲線趨勢相近； 2）肝細胞和肝癌細胞 106 生長密度，肝癌細胞 E 鈣粘素（53.89± 3.31）表達仍高于肝細胞（28.23± 1.23），E 鈣粘素表達量在兩種細胞的不同區(qū)域存在明顯差異：肝細胞接觸區(qū)域 E 鈣粘素表達量為 28.94± 1.15，肝癌細胞接觸區(qū)域 E 鈣粘素表達量為 19.32± 7.17，p<0.05。肝細胞 E 鈣粘素分

6、布出現(xiàn)向相鄰細胞接觸面聚集，而非接觸面未見 E 鈣粘素分布，肝癌細胞 E 鈣粘素仍彌散分布于細胞表面，細胞非接觸面存在 E 鈣粘素分布；連續(xù)定點觀測肝細胞和肝癌細胞運動能力，肝細胞運動處于抑制狀態(tài)，肝癌細胞持續(xù)形變和運動，兩種細胞的運動速率和凈遷移距離存在顯著性差異，p<0.05；兩種細胞生長變化趨勢不同，肝細胞生長曲線在達到峰值0.79 后，立刻衰減至 0.11，肝癌細胞下降幅度相對較低（0.81 到 0.29） ； 3）肝細