跨膜蛋白CD81參與星形膠質(zhì)細(xì)胞的接觸抑制.pdf

1、接觸抑制在機(jī)體中具有重要的生理意義,機(jī)體內(nèi)器官組織的形態(tài)、大小,各類細(xì)胞數(shù)量的控制及細(xì)胞有絲分裂的控制與其有著密切的關(guān)系。CD81(Cluster designation81)分子,是四次跨膜蛋白(tetraspanin)超家族成員之一,具有影響細(xì)胞的黏附、激活、增殖和分化,改變細(xì)胞形態(tài)及抑制合胞體形成等生物學(xué)功能,在調(diào)節(jié)細(xì)胞有絲分裂活性與維持細(xì)胞間接觸的穩(wěn)定中起重要的作用。但CD81與接觸抑制之間是否相關(guān)以及具體的作用機(jī)制尚不清楚。本

2、研究通過(guò)檢測(cè)觀察在體新生大鼠和成年大鼠大腦皮質(zhì),以及體外培養(yǎng)中星形膠質(zhì)細(xì)胞低接觸和完全接觸時(shí)GFAP(成熟星形膠質(zhì)細(xì)胞的標(biāo)志)、Vimentin(幼稚低分化細(xì)胞的標(biāo)志)、PCNA(細(xì)胞增殖的標(biāo)志)和CD81的mRNA及蛋白的表達(dá),比較在體大腦皮質(zhì)星形膠質(zhì)細(xì)胞和離體培養(yǎng)的星形膠質(zhì)細(xì)胞在成熟、增殖以及與 CD81的表達(dá)方面的異同,探討CD81與星形膠質(zhì)細(xì)胞接觸抑制之間的關(guān)系。
　　本研究包括在體與離體研究?jī)蓚€(gè)方面:㈠在體情況下,從基因

3、水平和蛋白水平看相關(guān)指標(biāo)的表達(dá)差異性:①采用RT-PCR方法,提取新生大鼠與成年大鼠新鮮大腦皮層,勻漿提取總RNA,設(shè)計(jì)引物(β-actin、GFAP、Vimentin、PCNA與CD81),采用RT-PCR方法對(duì)相應(yīng)指標(biāo)的mRNA進(jìn)行半定量分析。②采用Western blot方法,分別提取新生大鼠和成年大鼠的大腦皮層,制成蛋白樣品,進(jìn)行電泳、轉(zhuǎn)膜、免疫反應(yīng)、顯影,對(duì)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。在體實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:成年組大腦皮質(zhì)細(xì)胞的CD81和G

4、FAP的mRNA表達(dá)顯著高于新生組的表達(dá),而Vimentin與PCNA的mRNA表達(dá)量明顯低于新生組的表達(dá),差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);成年組大腦皮質(zhì)細(xì)胞CD81蛋白的表達(dá)顯著高于新生組的表達(dá)(P<0.01)。結(jié)果表明:①新生大鼠腦皮質(zhì)星形膠質(zhì)細(xì)胞處于未成熟階段,增殖力強(qiáng),CD81低表達(dá);②成年鼠腦皮質(zhì)星形膠質(zhì)細(xì)胞處于成熟階段,增殖抑制,CD81高表達(dá);㈡離體細(xì)胞培養(yǎng)的情況下,首先,進(jìn)行星形膠質(zhì)細(xì)胞體外培養(yǎng),觀察體外培養(yǎng)星形膠

5、質(zhì)細(xì)胞不同時(shí)間形態(tài)學(xué)變化,按照不同時(shí)間段細(xì)胞形態(tài)的接觸狀況,分為低接觸組(48h)和全接觸組(96h),分別收集不同接觸狀態(tài)下兩組的細(xì)胞,從基因水平和蛋白水平看相關(guān)指標(biāo)的表達(dá):①采用RT-PCR方法,收集不同組細(xì)胞,提取不同組的細(xì)胞總 RNA,設(shè)計(jì)引物(β-actin、GFAP、Vimentin、PCNA與CD81),RT-PCR對(duì)相應(yīng)指標(biāo)的mRNA進(jìn)行半定量分析;②采用Western blot方法,收集兩組星形膠質(zhì)細(xì)胞,裂解離心以后,

6、制成蛋白樣品,進(jìn)行跑膠、轉(zhuǎn)膜、免疫反應(yīng)、顯影,對(duì)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)的分析。離體實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,全接觸組星形膠質(zhì)細(xì)胞的CD81和GFAP的mRNA表達(dá)顯著高于低接觸組的表達(dá),而Vimentin與PCNA的mRNA表達(dá)量顯著低于低接觸組的表達(dá),差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);全接觸組星形膠質(zhì)細(xì)胞CD81蛋白的表達(dá)顯著高于低接觸組的表達(dá)(P<0.05)。結(jié)果表明:①低接觸時(shí),細(xì)胞未成熟、增殖力強(qiáng)、CD81表達(dá)不高;②接觸時(shí),細(xì)胞成熟、增殖抑制

7、、CD81表達(dá)增高。
　　結(jié)論:⑴離體培養(yǎng)的星形膠質(zhì)細(xì)胞從低接觸狀態(tài)演變到高接觸狀態(tài)重演了其在體內(nèi)從未成熟(低分化)到成熟(高分化)的演化過(guò)程。⑵新生鼠和成年鼠其腦部的星形膠質(zhì)細(xì)胞均處于接觸狀態(tài),新生鼠星形膠質(zhì)細(xì)胞增殖力強(qiáng),成年鼠腦星形膠質(zhì)細(xì)胞增殖抑制,兩者之間的差別在于成年鼠星形膠質(zhì)細(xì)胞膜上表達(dá)跨膜蛋白CD81,而新生鼠中星形膠質(zhì)細(xì)胞膜上CD81低表達(dá)。⑶離體培養(yǎng)的星形膠質(zhì)細(xì)胞,低接觸時(shí)增殖力強(qiáng)、CD81低表達(dá),接觸程度增加時(shí)C