二黃糖腎康湯劑對實驗性糖尿病腎病大鼠細胞因子TGF-β-,1-和PDGF-B表達的影響.pdf

1、目的；糖尿病腎病[diabetic nephropathy,DN)是糖尿病危害較大的微血管并發(fā)癥，也是致死、致殘的主要原因之一。據(jù)報道，在歐美國家，終末期腎病(ESRD)約有1/3為糖尿病所致，且75％為2型糖尿病。該病預(yù)后差，死亡率高，嚴重威脅人類的健康。目前國內(nèi)外對本病尚無理想的治療方法和藥物。 DN典型的病理改變?yōu)槟I臟肥大、基底膜增厚、腎小球細胞外基質(zhì)成分積聚等，其發(fā)病機制主要與高血糖、腎臟血流動力學(xué)異常、家族遺傳性等有關(guān)

2、。近年來隨著分子生物學(xué)技術(shù)的進步，研究發(fā)現(xiàn)有多種細胞因子參與DN的發(fā)生發(fā)展過程，其中以轉(zhuǎn)化生長因子(TGF-β)、血小板衍化生長因子(PDGF)為核心因子，其作用涉及到腎小球血流動力學(xué)改變、細胞外基質(zhì)代謝、細胞增殖利細胞肥大等諸多方面。二者在DN發(fā)生、發(fā)展過程中都起著極其重要的作用。 中西醫(yī)結(jié)合學(xué)院腎病研究室采用益脾健腎，活血降濁的二黃糖腎康湯劑(黃芪、寄生、大黃、黨參、茯苓、水蛭、鬼箭羽等)治療本病，取得了較好的療效。本實驗采

3、用切除右側(cè)腎臟加腹腔注射鏈尿佐菌素(STZ)的方法復(fù)制DN大鼠模型，觀察二黃糖腎康湯劑對血糖、腎功能、腎臟形態(tài)及相關(guān)細胞因子TGI-β1和PDGF-B表達的影響，探討本方的作用機理，為臨床治療DN提供科學(xué)的實驗依據(jù)。 方法：選用清潔級雄性健康SD大鼠60只，隨機抽10只為假手術(shù)組(sham-operation group，A組)，其余50只行右腎切除術(shù)，2：周后傷口愈合，按45mg·kg-1腹腔注射鏈尿佐菌素(STZ)，48h后

4、尾尖取血，測定血糖，取尿測尿糖。血糖≥16.7mmol·L-1，尿糖陽性，尿蛋白陽性，尿量大于A組150％視為成模。將成模大鼠隨機分為：模型組(modelgroup，B組)、二黃糖腎康湯劑高劑量組(high-doseErhuangtangshenkang group，C組)、二黃糖腎康湯劑低劑量組(Low-dose Erhuangtangshenkang,group，D組)、苯那普利組(Benazepril；group，E組)，每組10

5、只。二黃糖腎康湯劑治療組和苯那普利組均給予糖適平。本實驗共8周。于第8周用代謝籠收集24小時尿液，檢測24小時尿蛋白(urinaryprotein，Upro)定量、尿肌酐(urinary creatinine，Ucr)和尿β2微球蛋白(urinary β2-MG)的測定。最后一次給藥后，禁食8小時，稱重，斷頭取血，分離血清，檢測空腹血糖(FPG)，尿素氮(BUN)，血肌酐：(serum creatinine，Scr)，并計算肌酐清除率(

6、creatinine clearance，Ccr)。無菌操作取左腎，去掉包膜稱重，計算腎重/體重(kidney weight/bodyweight，KW/BW);取小塊的腎組織固定，用于觀察腎臟病理改變以及檢測相關(guān)細胞因子TGF-β1和PDGF-B的表達。血、尿生化指標均用全自動生化分析儀測定。免疫組化法檢測TGF-β1和PDGF-B的表達。 結(jié)果： 1二黃糖腎康湯劑對血、尿生化指標的影響1.1二黃糖腎康湯劑對FPG的影

7、響B(tài)組FPG(24.25±3.14)明顯高于A組，兩組比較有顯著性差異.(p＜0.01)。經(jīng)用藥干預(yù)后，各治療組與B組比較顯著下降(p＜0.01)。E組(15.17±2.72)與C組(14.08±2.75)比較無顯著性差異(p＞0.05)；C組明顯低于D組(18.01±2.35)，兩組比較有顯著性差異(p＜0.01)。 1.2二黃糖腎康湯劑對DN大鼠24小時Upro的影響B(tài)組(9.88±1.14)明顯高于A組(3.40±1.34)，兩組

8、比較有顯著性差異(p＜0.01)。經(jīng)用藥干預(yù)，各治療組均低于B組，有顯著性差異(p＜0.01)。D組(8.29±1.44)和E組(7.97±1.60)均高于C組(6.05±1.34)，有顯著性差異(p＜0.05，p＜0.01)； D組和E組比較無統(tǒng)計學(xué)意義(p＞0.05)。 1.3 二黃糖腎康湯劑對DN大鼠KW/BW的影響B(tài)組：(6.82±0.52)高于A組( 3.37±0.69)，兩組比較有顯著性差異：(p＜0.01)。各治療

9、組與B組相比明顯下降(p＜0.05，p＜0.01)，有顯著差異。E組(4.80±0.85)同C組(4.66±0.69)比較無顯著性差異(p＞0.05)；C組明顯低于D組(6.06±0.51)，兩組比較有顯著性差異(p＜0.01)。 1.4二黃糖腎康湯劑對DNI大鼠BUN、Scr和Ccr的影響與A組(5.11±0.58)比較，B組BUN(24.13±2.01)明顯升高，有顯著性差異(p＜0.01.)。治療組與B組比較明顯下降，有顯

10、著性差異(p＜0.01)。C組(15.14±3.02)、D組(16.44±3.09)和E組(15.09±2.40)之間無明顯差異(P＞0.05)。 B組Scr(205.37±34.95)與A組(75.21±10.37)比較明顯升高，有顯著性差異(P＜0.01)。各治療組與B組比較明顯下降，有顯著性差異(p＜0.01)。 C組(132.39±11.96)、D組(133.65±13.41)和E組(124.81±14.96)之間無明顯

11、統(tǒng)計學(xué)差異，(p＞0.05)。 A組Ccr(3.30±0.46)明顯高于B組(1.13±0.36)，兩組比較有顯著性差異(P＜0.01)。治療組均高于B組，有統(tǒng)計學(xué)差異(p＜0.05)℃組(1.44±0.25)、D組(1.43±0.23)和E組(1.47±0.78)之間無顯著性差異(p＞0.05)。 1.5二黃糖腎康湯劑對DN大鼠尿β2-MG的影響B(tài)組尿β2-MG(207.83±55.07)明顯高于A組(30.16±13.12)

12、，兩組比較有顯著性差異(p＜0.01)。治療組與B組比較下降，有統(tǒng)計學(xué)差異(p＜0.05)℃組(103.91±48.83)、D組(120.09±56.81)和E組(130.05±41.36)比較無統(tǒng)計學(xué)意義(p＞0.05)。 2二黃糖腎康湯劑對DN大鼠腎臟病理變化的影響與A組比較，藥物治療組與B組皆出現(xiàn)腎小球體積明顯增大，腎小球系膜區(qū)擴張，細胞外基質(zhì)成分增多，陽性物質(zhì)沉積增多。尤其B組，多數(shù)大鼠出現(xiàn)彌漫性系膜增生℃組.D組、E組

13、皆能在一定程度上}改善系膜增生以及動脈病變的程度。 3二黃糖腎康湯劑對DN大鼠TGF-β1和PDGF-B的蛋白表達的影響與A組相比較，B組和藥物治療組腎組織內(nèi)均呈強陽性表達，有顯著性差異(p＜0.01)。治療組腎組織內(nèi)陽性表達低于模型組：有統(tǒng)計學(xué)意義(p＜0.05)。 D組與E組之間比較無顯著性差異(p＞0.05)℃組腎組織內(nèi)陽性表達低于E組，有統(tǒng)計學(xué)意義(p＜0.05)結(jié)論1 二黃糖腎康湯劑能哆減少尿蛋白的丟失，降低腎重/體重