青光眼藥物及其防腐劑對眼表的影響和機(jī)制的研究.pdf

1、青光眼是全球第二位的不可逆性致盲眼病，眼壓是目前唯一已經(jīng)明確的導(dǎo)致青光眼發(fā)生和發(fā)展的重要因素。通過使用青光眼藥物降低眼壓而延緩和阻止患者的視功能損害是青光眼治療的重要手段。青光眼藥物長期使用后的眼部毒副作用和與之伴隨的眼部不適癥狀正日益受到青光眼醫(yī)務(wù)工作者和患者的重視。國外已進(jìn)行了相關(guān)研究，但國內(nèi)還未見相關(guān)的研究報道，尤其對國產(chǎn)常用藥物對眼表的影響尚不明了。為探討青光眼藥物及其中添加的防腐劑對眼表的影響和其可能發(fā)生的機(jī)制，我們進(jìn)行了動物

2、實(shí)驗(yàn)、細(xì)胞實(shí)驗(yàn)、臨床用藥前后前瞻性研究和長期用藥對眼表影響的研究。 第一章青光眼藥物及添加的防腐劑對兔眼表的影響 目的：探討青光眼藥物毛果蕓香堿、噻嗎心安、酒石酸溴莫尼定(阿法根)和布林佐胺(派立明)滴眼液及其添加的防腐劑三氯叔丁醇、硫柳汞和氯化苯甲烴胺(BAC)對兔眼表組織的影響。 方法：選取新西蘭大白兔27只，隨機(jī)選擇3只兔列入正常對照組；其余24只兔隨機(jī)分為4組，列入藥物組，每組6只兔。用藥組右眼使用青光眼

3、藥物，左眼使用對應(yīng)的防腐劑，毛果蕓香堿和三氯叔丁醇每日滴用四次，其它三組藥物均每日滴2次，連續(xù)用藥30天。取球結(jié)膜組織行蘇木素-伊紅(HE)染色計(jì)數(shù)結(jié)膜上皮層炎癥細(xì)胞數(shù)；角膜行掃描電鏡檢測并進(jìn)行上皮損害分級評分。 結(jié)果：用藥30天后，與正常對照組比較，各用藥組球結(jié)膜上皮層及基質(zhì)層的炎癥細(xì)胞數(shù)量增多。其中毛果蕓香堿(P=0.085)和三氯叔丁醇(P=0.198)產(chǎn)生的影響最小，噻嗎心安(P=0.004)和硫柳汞(P=0.004)次

4、之，阿法根(P=0.003)、派立明(P=0.004)、0.005％BAC(P=0.003)和0.01％BAC(P=0.004)導(dǎo)致球結(jié)膜炎癥細(xì)胞增加最顯著。青光眼藥物和防腐劑均可導(dǎo)致兔角膜上皮細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)的損傷，表現(xiàn)為細(xì)胞六邊形結(jié)構(gòu)變不規(guī)則、邊界不清、細(xì)胞膜皺縮、細(xì)胞間距增寬、上皮細(xì)胞表面的微絨毛丟失、細(xì)胞空洞和暗細(xì)胞增加。阿法根(P=0.003)、派立明(P=0.003)、0.005％BAC(P=0.003)和0.01％BAC(P=

5、0.003)對角膜上皮細(xì)胞的損傷較重，毛果蕓香堿(P=0.030)、三氯叔丁醇(P=0.019)、噻嗎心安(P=0.020)和硫柳汞(P=0.011)的損傷較輕。用藥各組左右兩眼的球結(jié)膜炎癥細(xì)胞數(shù)和角膜損害評分均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。 結(jié)論：毛果蕓香堿、噻嗎心安、阿法根、派立明及各滴眼液中添加的防腐劑在使用1個月后可導(dǎo)致兔球結(jié)膜炎癥細(xì)胞增加和角膜上皮細(xì)胞損傷；阿法根、派立明以及添加的防腐劑BAC對兔眼表的損傷較毛果蕓香堿、噻嗎心安及其添

6、加的防腐劑嚴(yán)重。青光眼藥物中添加的防腐劑是引起眼表損傷的重要原因。 第二章氯化苯甲烴胺對球結(jié)膜上皮細(xì)胞毒性機(jī)制的研究 目的：探討防腐劑氯化苯甲烴胺(BAC)對人球結(jié)膜上皮細(xì)胞毒性損傷的機(jī)制。 方法：體外培養(yǎng)人球結(jié)膜上皮細(xì)胞(Chang細(xì)胞)，在96孔板和Lab-Tek細(xì)胞培養(yǎng)板中進(jìn)行處理，設(shè)0.005％，0.01％和0.02％BAC溶液處理組和PBS對照組。作用15分鐘后，Lab-Tek用4％多聚甲醛固定進(jìn)行免疫

7、熒光檢測；96孔板采用中性紅實(shí)驗(yàn)、Yopro-1實(shí)驗(yàn)和Hoechst33342實(shí)驗(yàn)進(jìn)行細(xì)胞凋亡的檢測。 結(jié)果：BAC溶液作用15分鐘后，Chang細(xì)胞Phalloidin表達(dá)減弱，體積縮小、細(xì)胞骨架受到破壞，細(xì)胞的皺縮程度與BAC的濃度呈正比。在中性紅實(shí)驗(yàn)中，各BAC處理組細(xì)胞活性均顯著低于PBS對照組(P<0.0001)，且隨著BAC濃度的升高，球結(jié)膜上皮細(xì)胞活性逐漸下降。PBS對照組Yopro熒光值和Hoechst熒光值最低

8、，凋亡細(xì)胞所占比例最低，各濃度BAC處理組Yopro值和Hoechst值均顯著高于PBS組；且隨著BAC濃度的梯度升高，二者均呈梯度上升。0.005％BAC處理組與PBS對照組對比Yopro值的P值=0.0001，Hoechst值P值=0.0002，其余濃度BAC處理組的Yopro值和Hoechst值與PBS組對比，P值均小于0.0001. 結(jié)論：0.005％，0.01％和0.02％BAC溶液可引起人球結(jié)膜上皮細(xì)胞的細(xì)胞骨架的破

9、壞和細(xì)胞凋亡發(fā)生，細(xì)胞凋亡在BAC導(dǎo)致的球結(jié)膜上皮細(xì)胞損害過程中的起重要作用。 第三章短期使用青光眼藥物對眼表影響的前瞻性研究 目的：探討短期局部使用青光眼藥物對患者眼表的影響。 方法：收集初發(fā)的原發(fā)性開角型青光眼患者18例32眼，激光周邊虹膜切除術(shù)后眼壓偏高需要聯(lián)合局部青光眼藥物治療的原發(fā)閉角型青光眼患者9例12眼，根據(jù)用藥種類分為3組：噻嗎心安組、阿法根組和派立明組。其中噻嗎心安組8例12眼，阿法根組9例15

10、眼，派立明組10例17眼。所有患者僅局部使用一種青光眼藥物，每日滴用2次。在用藥前、用藥后1月、2月和3月行淚膜破裂時間(BUT)、基礎(chǔ)淚液分泌試驗(yàn)(ST)和結(jié)膜印跡細(xì)胞(IC)檢查。 結(jié)果：用藥后患者的BUT值和ST值呈下降趨勢。用藥1月后，BUT值和ST值與用藥前比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；隨著用藥時間的延長，各組用藥2月和3月后BUT值和ST值均顯著低于用藥前水平(P<0.05)?；颊呓Y(jié)膜印跡細(xì)胞學(xué)的表現(xiàn)改變較緩慢，在用藥3個月后的

11、IC分級可發(fā)現(xiàn)與用藥前有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P=0.046)。 結(jié)論：使用噻嗎心安、阿法根或派立明滴眼液2個月即可導(dǎo)致患者淚膜穩(wěn)定性下降，淚液分泌減少；使用3個月后可引起結(jié)膜上皮的損傷，主要表現(xiàn)為結(jié)膜上皮細(xì)胞角化，杯狀細(xì)胞減少。 第四章長期使用青光眼藥物對眼表影響的臨床研究 目的：探討長期使用青光眼藥物對患者眼表的影響。 方法：收集2005年6月至2006年12月在中山大學(xué)中山眼科中心青光眼?？崎T診就診、局部使用

12、青光眼藥物3個月以上的青光眼患者65例108只眼，分為單種藥物使用組(單純使用1％毛果蕓香堿、0.5％噻嗎心安、0.2％阿法根或1％派立明)和多種藥物使用組，其中單種藥物使用組38例63眼，多種藥物使用組27例45眼；另收集正常對照組25例25只眼。對所有觀察對象進(jìn)行淚膜破裂時間測定(BUT)、基礎(chǔ)淚液分泌試驗(yàn)(ST)、角膜上皮熒光素染色、角結(jié)膜上皮虎紅染色以及結(jié)膜印跡細(xì)胞(IC)檢查。 結(jié)果：正常對照組BUT12.25±5.4

13、0s，ST11.65±4.66mm，單種藥物使用組BUT6.97±4.87s，ST7.19±5.36mm，均明顯低于正常對照組(BUTP=0.000；STP=0.001)。多種藥物使用組BUT4.81±2.45s，顯著短于正常對照組(P=0.000)和單種藥物使用組(P=0.008)；ST5.20±2.97mm，顯著少于正常對照組(P=0.000)和單種藥物使用組(P=0.026)。單種藥物使用組和多種藥物使用組的角膜熒光素染色評分和結(jié)