端粒酶hTERT基因反義核酸對TNF-α誘導的膀胱癌細胞（T24）凋亡的影響.pdf

1、目的端粒是真核細胞染色體末端特殊的DNA-蛋白質(zhì)結構，人類端粒含有TAGGG重復序列，具有重要的生物學功能。端?？煞€(wěn)定染色體，防止染色體末端融合，保護染色體結構基因。有關文獻報道，85％-90％以上的腫瘤細胞表達端粒酶活性。因而抑制端粒酶活性具有潛在的腫瘤防治的前景。人類端粒酶主要由三部分組成：人類端粒酶RNA成分(hTR)，人類端粒酶相關蛋白(TEP1)，人類端粒酶反轉錄酶催化亞單位 (hTERT)。hTR的功能是為染色體端粒延伸起模

2、板作用，人類端粒酶反轉錄酶催化亞單位 hTERT 是端粒酶活性表達的關鍵組分和限速因子。hTERT 基因mRNA在膀胱癌細胞中同時表現(xiàn)出高水平的表達，與端粒酶活性的表達一致。端粒酶RNA的反義核酸可以抑制端粒酶活性和腫瘤細胞的生長。本實驗探討hTERT基因的全硫代修飾反義寡核苷酸(AS PS-ODN)對膀胱癌細胞T24端粒酶活性抑制作用及hTERT基因的反義寡核苷酸對細胞因子TNF-α誘導膀胱癌T24細胞凋亡的影響。 方法采用T

3、RAP-銀染法及TRAP-PCR-ELISA法檢測膀胱癌細胞的端粒酶活性；采用RT-PCR方法檢測hTERT基因mRNA的表達水平；以間接免疫熒光標記法通過流式細胞儀檢測hTERT基因蛋白水平的變化；采用臺盼藍排斥試驗觀察hTERT AS PS-ODN與TNF-α共同作用對膀胱癌細胞T24生長活力的影響；倒置顯微鏡觀察凋亡細胞的形態(tài)學變化；通過流式細胞儀測定凋亡細胞的百分率。結果 hTERT 基因的全硫代修飾反義寡核苷酸(AS PS-O

4、DN)作用于膀胱癌細胞T24 48h，其端粒酶活性下降，作用72h，其端粒酶活性受到抑制，與正義寡核苷酸組，空白對照組相比有顯著性差異(P<0.05)；hTERT基因的全硫代修飾反義寡核苷酸(AS PS-ODN)作用于膀胱癌細胞T24后，hTERT基因mRNA表達水平及蛋白表達水平均明顯下降，與正義寡核苷酸組，空白對照組相比有顯著性差異(P<0.05)：hTERT AS PS-ODN作用于膀胱癌細胞T24后加入TNF-α作用48小時，膀

5、胱癌細胞T24的抑制率與對照組，S PS-ODN組，ASPS-ODN組，TNF-α組及S PS-ODN+TNF-α組相比有統(tǒng)計學差異(P<0.01)：hTERT AS PS-ODN作用于膀胱癌細胞T24后加入TNF-α作用48小時，細胞出現(xiàn)典型的凋亡形態(tài)變化；hTERT AS PS-ODN作用于膀胱癌細胞T24后加入TNF-α作48小時，凋亡細胞的百分率分別同對照組，S PS-ODN組，AS PS-ODN組，TNF-α組及S PS-OD