反義寡核苷酸靶向hTERT對K562細胞株端粒酶活性和細胞凋亡的影響.pdf_第1頁
已閱讀1頁,還剩47頁未讀 繼續(xù)免費閱讀

下載本文檔

版權說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內容提供方,若內容存在侵權,請進行舉報或認領

文檔簡介

1、本實驗設計靶向封閉hTERTmRNA的反義硫代寡核苷酸(antisensephosphorothioateoligodeoxynucleotide,ASPSODN),通過脂質體介導轉染K562細胞,觀察其對目的基因的抑制和對K562細胞端粒酶活性和細胞凋亡的影響,并對其作用機制進行初步探討,為hTERT作為反義基因治療靶點應用于白血病治療提供一定的實驗依據(jù)。 研究方法:選用三種濃度的反義硫代寡核苷酸(ASPSODN)分別為0.2

2、μM、0.6μM、1.0μM,同時設空白組、脂質體組和三種相同濃度正義硫代寡核苷酸(SPSODN)作為對照,分別轉染到人紅白血病細胞株K562,分別于24、48小時收集細胞進行檢測。用RT-PCR檢測靶基因hTERTmRNA的表達,PCR-ELISA檢測細胞端粒酶活性、流式細胞儀檢測細胞凋亡。觀察ASODN作用的特異性和不同濃度的ASODN對K562端粒酶活性和細胞凋亡的影響。 研究結果: 1、K562細胞被轉染24h后

3、,對K562細胞hTERT基因表達的影響(用hTERT與β-actine的比值表示,數(shù)據(jù)為掃描比值)脂質體組(0.80±0.24)、0.2μM的ASODN(0.69±0.12)和SODNhTERT(0.72±0.25)mRNA的表達與空白對照組(0.85±0.28)無差異,0.6μM的ASODN(0.42±0.16)比脂質體組能明顯下調hTERT表達,而同濃度的SODN(0.69±0.26)則下調不明顯,1.0μM的ASODN和SODN

4、對hTERT表達都表現(xiàn)出一定的抑制,采用苔盼藍拒染法染色顯示經(jīng)脂質體轉染的1.0μM寡核苷酸無論正義、反義細胞死亡明顯增多。 2、24h端粒酶相對活性空白對照組為88.9﹪,脂質體作用組為77.7﹪,兩者無顯著性差異,0.2μM、0.6μM、1.0μMASPSODN作用后端粒酶相對活性分別為60.6﹪、52﹪、58﹪,與空白對照組均有顯著性差異,其中0.6μM的ASPSODN與脂質體作用組有顯著性差異(P=0.037);而各正義

5、寡核苷酸組0.2μM、0.6μM、1.0μM端粒酶相對活性分別為76.1﹪、72.2﹪、65.7﹪,0.2μM、0.6μM正義寡核苷酸組與空白組、脂質體作用組均無統(tǒng)計學意義。48hASPSODN各作用組則更進一步抑制端粒酶活性,0.2μM、0.6μM、1.0μMASPSODN作用后端粒酶相對活性分別為61.0﹪、48.2﹪、53.0﹪;而48h各正義寡核苷酸組0.2μM、0.6μM、1.0μM端粒酶相對活性分別為74.8﹪、74.5﹪、

6、67.9﹪,0.2μM、0.6μMSPSODN作用組對端粒酶活性無明顯抑制。 3、流式細胞儀測0.6μM的ASPSODN和SPSODN組細胞凋亡率分別為4.34﹪和1.83﹪,脂質體作用組為1.84﹪,空白對照組為1.07﹪,ASPSODN和SPSODN組兩者有統(tǒng)計學差異(P<0.05),ASPSODN組與脂質體作用組及空白對照組有顯著性差異(P<0.01)。 研究結論: 1、反義寡核苷酸靶向hTERT能特異性抑

溫馨提示

  • 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
  • 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請聯(lián)系上傳者。文件的所有權益歸上傳用戶所有。
  • 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁內容里面會有圖紙預覽,若沒有圖紙預覽就沒有圖紙。
  • 4. 未經(jīng)權益所有人同意不得將文件中的內容挪作商業(yè)或盈利用途。
  • 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲空間,僅對用戶上傳內容的表現(xiàn)方式做保護處理,對用戶上傳分享的文檔內容本身不做任何修改或編輯,并不能對任何下載內容負責。
  • 6. 下載文件中如有侵權或不適當內容,請與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
  • 7. 本站不保證下載資源的準確性、安全性和完整性, 同時也不承擔用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。

最新文檔

評論

0/150

提交評論