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文檔簡介
1、目的:檢測Rce1(Ras and a-factor converting enzyme1)在膀胱腫瘤組織及對應(yīng)腫瘤旁正常移行上皮組織中的動態(tài)改變及其臨床意義;以慢病毒為載體,構(gòu)建shRNA干擾序列沉默Rce1基因,觀察Rce1低表達對人膀胱癌T24細胞凋亡百分比的影響和細胞周期分布的改變。
方法:采用實時熒光定量PCR(Quantitative Real-time PCR,qRT-PCR)和蛋白印記雜交(western bl
2、ot)技術(shù),分別檢測Rce1在12例膀胱腫瘤組織及對應(yīng)腫瘤旁正常上皮組織中mRNA和蛋白表達差異;應(yīng)用免疫組化技術(shù),檢測78例膀胱腫瘤組織,21例腫瘤旁正常上皮組織中Rce1的動態(tài)改變情況;結(jié)合病人的臨床pTNM分期,細胞組織學(xué)分級等病理資料,分析Rce1的動態(tài)改變與病人臨床特征,病理分型的關(guān)系。以慢病毒為載體,以Rce1為目的基因,設(shè)計shRNA-Rce1干擾序列,轉(zhuǎn)染T24細胞,采用嘌呤霉素篩選,建立穩(wěn)定低表達Rce1的T24細胞系
3、;采用實時熒光定量PCR和western blot技術(shù),分別檢測各組T24細胞中 Rce1在 mRNA和蛋白的表達水平;應(yīng)用流式細胞技術(shù)(flow cytometry,F(xiàn)CM),檢測各組T24細胞在細胞周期的分布情況,細胞凋亡率所占百分比。
結(jié)果:qRT-PCR和western blot顯示,在12對膀胱腫瘤及腫瘤旁正常上皮組織中 Rce1存在表達量的動態(tài)改變,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.00);78例腫瘤組織中,Rce1陽性表
4、達率為70.5%(55/78),腫瘤旁正常上皮組織中,檢測到Rce1表達的比例為19.0%(4/21),Rce1陽性表達在腫瘤及腫瘤旁正常上皮組織的百分比存在差異,統(tǒng)計學(xué)分析差別有意義(P=0.00);統(tǒng)計學(xué)分析提示,Rce1陽性表達率在腫瘤的細胞組織學(xué)分級的各個分級百分比存在差異,在pTNM分期中各T分期中陽性表達率也有差異,Rce1在存在腫瘤遠處轉(zhuǎn)移的病人中陽性表達百分比跟高(P<0.05);Kaplan-Meier分析不同病人的生
5、存時間顯示,與Rce1陰性病人相比,膀胱癌腫瘤中能夠檢測到Rce1表達的病人預(yù)后比較差(P=0.016)。與未感染病的空白對照組和感染病毒的陰性對照組相比,感染慢病毒干擾序列的T24細胞中Rce1在mRNA和蛋白表達水平明顯下調(diào)( P=0.00), Rce1低表達 T24細胞凋亡百分比增加, shRNA-Rce1組細胞在各周期的比例沒有顯著變化。
結(jié)論:Rce1在膀胱腫瘤組織中表達高于腫瘤旁正常上皮組織,Rce1可能參與了膀胱
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