Rce1在膀胱癌的表達(dá)及其對T24細(xì)胞周期和凋亡的影響.pdf

1、目的：檢測Rce1(Ras and a-factor converting enzyme1)在膀胱腫瘤組織及對應(yīng)腫瘤旁正常移行上皮組織中的動(dòng)態(tài)改變及其臨床意義；以慢病毒為載體，構(gòu)建shRNA干擾序列沉默Rce1基因，觀察Rce1低表達(dá)對人膀胱癌T24細(xì)胞凋亡百分比的影響和細(xì)胞周期分布的改變。
　　方法：采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR(Quantitative Real-time PCR，qRT-PCR)和蛋白印記雜交（western bl

2、ot）技術(shù)，分別檢測Rce1在12例膀胱腫瘤組織及對應(yīng)腫瘤旁正常上皮組織中mRNA和蛋白表達(dá)差異；應(yīng)用免疫組化技術(shù)，檢測78例膀胱腫瘤組織，21例腫瘤旁正常上皮組織中Rce1的動(dòng)態(tài)改變情況；結(jié)合病人的臨床pTNM分期，細(xì)胞組織學(xué)分級等病理資料，分析Rce1的動(dòng)態(tài)改變與病人臨床特征，病理分型的關(guān)系。以慢病毒為載體，以Rce1為目的基因，設(shè)計(jì)shRNA-Rce1干擾序列，轉(zhuǎn)染T24細(xì)胞，采用嘌呤霉素篩選，建立穩(wěn)定低表達(dá)Rce1的T24細(xì)胞系

3、；采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR和western blot技術(shù)，分別檢測各組T24細(xì)胞中 Rce1在 mRNA和蛋白的表達(dá)水平；應(yīng)用流式細(xì)胞技術(shù)(flow cytometry，F(xiàn)CM)，檢測各組T24細(xì)胞在細(xì)胞周期的分布情況，細(xì)胞凋亡率所占百分比。
　　結(jié)果：qRT-PCR和western blot顯示，在12對膀胱腫瘤及腫瘤旁正常上皮組織中 Rce1存在表達(dá)量的動(dòng)態(tài)改變，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.00)；78例腫瘤組織中，Rce1陽性表

4、達(dá)率為70.5％（55/78）,腫瘤旁正常上皮組織中，檢測到Rce1表達(dá)的比例為19.0%(4/21),Rce1陽性表達(dá)在腫瘤及腫瘤旁正常上皮組織的百分比存在差異，統(tǒng)計(jì)學(xué)分析差別有意義（P=0.00）；統(tǒng)計(jì)學(xué)分析提示，Rce1陽性表達(dá)率在腫瘤的細(xì)胞組織學(xué)分級的各個(gè)分級百分比存在差異，在pTNM分期中各T分期中陽性表達(dá)率也有差異，Rce1在存在腫瘤遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的病人中陽性表達(dá)百分比跟高（P<0.05）；Kaplan-Meier分析不同病人的生

5、存時(shí)間顯示，與Rce1陰性病人相比，膀胱癌腫瘤中能夠檢測到Rce1表達(dá)的病人預(yù)后比較差（P=0.016）。與未感染病的空白對照組和感染病毒的陰性對照組相比，感染慢病毒干擾序列的T24細(xì)胞中Rce1在mRNA和蛋白表達(dá)水平明顯下調(diào)（ P=0.00）， Rce1低表達(dá) T24細(xì)胞凋亡百分比增加, shRNA-Rce1組細(xì)胞在各周期的比例沒有顯著變化。
　　結(jié)論：Rce1在膀胱腫瘤組織中表達(dá)高于腫瘤旁正常上皮組織，Rce1可能參與了膀胱