載體介導(dǎo)siRNA體內(nèi)抑制鼠乳腺癌細(xì)胞KLK6基因表達(dá)及功能研究.pdf

1、山東師范大學(xué)碩士學(xué)位論文載體介導(dǎo)siRNA體內(nèi)抑制鼠乳腺癌細(xì)胞KLK6基因表達(dá)及功能研究姓名：季丙元申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：細(xì)胞生物學(xué)指導(dǎo)教師：李云龍胡成進(jìn)20060410山東師范大學(xué)碩士學(xué)位論文‘摘要Kallikrein是一類編碼絲氨酸蛋白酶的基因家族，該家族由15個成員組成。該家族多數(shù)成員的表達(dá)與激素依賴相關(guān)型腫瘤密切聯(lián)系，暗示了它們與作為前列腺癌臨床生物學(xué)標(biāo)志的前列腺特異性抗原PSA(hK3)一樣，具有生物學(xué)標(biāo)志潛力。KLK6是該

2、基因家族成員之一，編碼絲氨酸蛋白酶(hK6)，據(jù)報道KLK6與性激素依賴性器官腫瘤一乳腺癌的發(fā)病有關(guān)，但參與的機制尚不清楚。為此，本課題擬通過siRNA技術(shù)來探討該基因在乳腺癌中的功能。目的：運用siRNA技術(shù)探討Ki。K6基因在乳腺癌發(fā)生發(fā)展中的作用。方法：應(yīng)用乳腺癌細(xì)胞株MCF7建立裸鼠乳腺癌動物模型，體外合成KLK6siRNA并構(gòu)建其表達(dá)載體，瘤體注射siRNA或其表達(dá)載體，探討siRNA對荷瘤鼠瘤體細(xì)胞中KLK6基因的干擾效果及

3、其對瘤體細(xì)胞生物學(xué)特性的影響。結(jié)果：載體介導(dǎo)的siRNA體內(nèi)抑制了人乳腺癌荷瘤鼠KLK6的表達(dá)后，移植瘤生長速度加快，腫瘤細(xì)胞S期明顯增加，細(xì)胞凋亡有下降趨勢。結(jié)論：本實驗運用了載體介導(dǎo)的siRNA技術(shù)成功抑制了裸鼠體內(nèi)人乳腺癌移植瘤中KLK6基因的表達(dá)。實時熒光定量PCR檢測KLK6mRNA表達(dá)降低、免疫組化檢測hK6蛋白表達(dá)量明顯減少。流式細(xì)胞儀分析結(jié)果顯示，實驗組S期細(xì)胞明顯增多、移植瘤生長速度加快，細(xì)胞凋亡有下降趨勢。提示KLK