白血病細胞及其影響下內皮細胞半乳凝素-9的表達特征研究.pdf

1、目的：急性白血病(AL)是常見的血液惡性腫瘤,雖經化療及造血干細胞移植可使部分患者獲得完全緩解,但仍有部分患者復發(fā)難治,總體五年生存率很差。原因可能與AL細胞誘導形成免疫耐受相關。研究發(fā)現(xiàn)AL細胞誘導免疫耐受可能通過以下途徑,下調MHC分子表達,缺乏協(xié)同刺激分子不能有效激活T細胞產生免疫應答;分泌細胞因子抑制免疫反應;表達Fas配體誘導T細胞凋亡;DC細胞和NK細胞功能缺陷;以及Treg細胞增加。由此,AL細胞形成了一個免疫抑制性的微環(huán)

2、境。而其他細胞成分也能參與免疫抑制性微環(huán)境的形成,如內皮細胞。內皮細胞是AL微環(huán)境與外界相通的主要屏障,具有選擇通透性、產生細胞因子及參與淋巴細胞跨內皮活動等功能。最近研究發(fā)現(xiàn),半乳凝素-9(Gal-9)具有重要的免疫調節(jié)功能,其在誘導免疫耐受及腫瘤免疫中發(fā)揮了重要作用。Gal-9與Th1、Th17細胞及CTL細胞上的受體Tim-3結合,導致這些細胞凋亡;同時還能誘導初始T細胞分化為Treg細胞,擴增MDSC,進一步誘導免疫耐受。Gal

3、-9在多種腫瘤細胞表達,通過Gal-9/Tim-3誘導腫瘤特異性CD4+T細胞凋亡而參與腫瘤免疫逃逸;并參與腫瘤細胞與內皮細胞及ECM的粘附而影響腫瘤細胞的轉移。但目前無AL細胞以及其影響下內皮細胞Gal-9表達的報道。因此,本研究擬對AL細胞及其影響下內皮細胞Gal-9的表達特征進行研究,以期為研究Gal-9/Tim-3途徑參與白血病免疫逃逸及轉移奠定基礎。
　　方法：用AL患者原代標本進行觀察,選擇符合條件的患者,取其骨髓或外

4、周血分離單核細胞,采用流式細胞術檢測原代急性白血病細胞Gal-9表達情況,以非AL患者Gal-9表達為正常對照。檢測后讀取數據,運用CELLQuest軟件分析結果。取具有代表性的白血病細胞系,如急性髓系白血病細胞系(HL-60)、慢粒急性變白血病細胞(K562)、T細胞白血病細胞系(Jurkat),培養(yǎng)至對數生長期后檢測Gal-9的表達情況。以EAHY926細胞代表內皮細胞,檢測Gal-9的表達及分布情況。并檢測白血病細胞影響下EAHY

5、926細胞Gal-9的表達情況。以HL-60細胞與K562細胞上清與EAHY926細胞共培養(yǎng)24小時后進行檢測。采用流式細胞術、免疫組化及WesternBlot對Gal-9表達情況進行半定量檢測。同時運用相關軟件及統(tǒng)計學方法對檢測結果進行分析。
　　結果：AL患者骨髓及外周血原代白血病細胞表達Gal-9,表達水平為77.44±32.30(％),與正常對照組表達水平6.05±6.58(%)相比,原代急性白血病細胞高表達Gal-9,表

6、達差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。已檢測的三種白血病細胞系(HL-60、K562、Jurkat)均能檢測到Gal-9的表達,且表達水平較高。對EAHY926細胞檢測發(fā)現(xiàn),細胞內高表達Gal-9:92.67±2.33(%);細胞膜低表達Gal-9:0.25±0.11(%)。采用專業(yè)CCD拍攝免疫組化圖片,并用Image-ProPlus軟件分析免疫組化圖片。結果顯示,白血病細胞上清處理后EAHY926細胞Gal-9表達水平發(fā)生變化,其中

7、HL-60細胞上清組Gal-9表達下降明顯(P<0.05);而K562細胞上清組表達水平無明顯變化(P>0.05)。同時WesternBlot結果顯示,經HL-60細胞與K562細胞上清處理后EAHY926細胞Gal-9的表達水平均降低。
　　結論：與正常對照相比,急性白血病患者骨髓及外周血原代白血病細胞能高表達Gal-9。由于Gal-9與其天然受體Tim-3結合而導致Th1細胞、Th17細胞及腫瘤細胞特異性CTL凋亡;因此,白血

8、病細胞可能通過Gal-9/Tim-3途徑參與免疫耐受及免疫逃逸。檢測的三種白血病細胞系均能檢測到Gal-9的高表達,提示白血病細胞表達Gal-9具有普遍性。由于Gal-9參與腫瘤細胞與內皮細胞及ECM的粘附而影響腫瘤細胞的轉移;且內皮細胞高表達Gal-9,而在白血病細胞影響下其表達水平降低;因此,白血病細胞可能通過降低內皮細胞Gal-9表達而實現(xiàn)轉移浸潤的目的。我們的實驗結果為進一步探討白血病細胞Gal-9/Tim-3途徑參與免疫耐受、