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文檔簡介
1、目的:研究ADRM1在白血病細(xì)胞中的表達(dá)及其作用。
方法:⑴實(shí)時定量 RT-PCR(qRT-PCR)及 Western Blot方法分析白血病細(xì)胞中ADRM1 mRNA與蛋白表達(dá)水平;⑵利用短發(fā)卡 RNA(shRNA)下調(diào) HL60白血病細(xì)胞ADRM1表達(dá);qRT-PCR及 Western Blot分析 ADRM1 shRNA的沉默效果;⑶應(yīng)用姬姆薩染色、生長曲線法、細(xì)胞集落形成實(shí)驗(yàn)、Transwell實(shí)驗(yàn)、流式細(xì)胞周期與凋亡
2、檢測、Western Blot觀察NF-κBp65核轉(zhuǎn)位等方法研究ADRM1下調(diào)后HL60生物學(xué)行為變化與分子機(jī)制。
結(jié)果:①ADRM1 mRNA在急性白血病細(xì)胞中表達(dá)上調(diào)(n=116);ADRM1 mRNA表達(dá)水平與白血病幼稚細(xì)胞比率成正相關(guān),P<0.05;ADRM1蛋白在急性白血病細(xì)胞中普遍上調(diào)(n=16);②利用shRNA干擾成功下調(diào)HL60細(xì)胞ADRM1表達(dá);③姬姆薩染色顯示 ADRM1下調(diào)后HL60細(xì)胞形態(tài)未見顯著差
3、異;后續(xù)功能實(shí)驗(yàn)表明 ADRM1下調(diào)顯著抑制HL60細(xì)胞增殖(抑制率為48.82±12.58%)和集落形成,使細(xì)胞停滯在G0/G1期并誘發(fā)細(xì)胞凋亡,但對細(xì)胞遷移、侵襲能力則無顯著影響;Western Blot檢測顯示ADRM1下調(diào)不影響NF-κBp65總蛋白和漿蛋白表達(dá),但顯著抑制其在核內(nèi)表達(dá)。這說明 ADRM1促進(jìn)HL60細(xì)胞 NF-κB p65蛋白核轉(zhuǎn)位。
結(jié)論:ADRM1在白血病細(xì)胞中高表達(dá),ADRM1下調(diào)可能通過抑制N
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