體神經(jīng)-內(nèi)臟神經(jīng)吻合后異類神經(jīng)再生的蛋白質(zhì)組學(xué)研究.pdf

1、第一部分：大鼠脊神經(jīng)蛋白質(zhì)組研究中雙向電泳技術(shù)的建立 目的:探討雙向凝膠電泳技術(shù)在大鼠脊神經(jīng)組織蛋白質(zhì)組研究中的應(yīng)用。 方法:應(yīng)用高蛋白溶解度裂解液(Urea9M,CHAPS4％,Tris40mM,DTT65mM,PMSF2mM,EDTA5mM,Phamalyte0.5％)提取正常大鼠L4前根脊神經(jīng)組織蛋白，以固相pH梯度等電聚焦電泳和垂直板SDS-PAGE電泳結(jié)合的方法進(jìn)行蛋白質(zhì)的分離，使用銀染和考馬斯亮藍(lán)兩種方法分別

2、對(duì)凝膠進(jìn)行染色。 結(jié)論:本實(shí)驗(yàn)采用的高離液劑體系的裂解液，及對(duì)第一向和第二向電泳過(guò)程中各個(gè)因素及環(huán)節(jié)的把握，是獲得大鼠脊神經(jīng)組織蛋白2DGE圖譜的關(guān)鍵。 第二部分：體神經(jīng)-內(nèi)臟神經(jīng)吻合后異類神經(jīng)與單純體神經(jīng)再生的比較蛋白質(zhì)組研究 目的:探討大鼠體神經(jīng)-內(nèi)臟神經(jīng)吻合后異類神經(jīng)再生(foreignnerveregeneration,FNR)與單純體神經(jīng)再生(somaticnerveregeneration,SNR)后

3、在蛋白質(zhì)組水平的異同，在分子水平明確再生異類神經(jīng)的性質(zhì)。 方法:建立大鼠FNR和SNR模型，手術(shù)后90天應(yīng)用建立的優(yōu)化體系進(jìn)行FNR和SNR總蛋白質(zhì)的分離。然后通過(guò)ImageMaster分析軟件對(duì)兩組凝膠圖譜進(jìn)行分析，找出FNR組和SNR組在蛋白組水平的異同，最后通過(guò)基質(zhì)輔助激光解析離子飛行時(shí)間質(zhì)譜對(duì)篩選的蛋白點(diǎn)進(jìn)行鑒定。 結(jié)論:體神經(jīng)-內(nèi)臟神經(jīng)吻合后再生的異類神經(jīng)纖維在分子水平可能是體神經(jīng)成分為主。由于異類神經(jīng)再生和單

4、純體神經(jīng)再生后作用的靶器官不同，在某些蛋白質(zhì)的表達(dá)量上有區(qū)別。 第三部分體神經(jīng)-內(nèi)臟神經(jīng)吻合后異類神經(jīng)再生過(guò)程的蛋白質(zhì)組研究 目的:采用蛋白質(zhì)學(xué)技術(shù)了解體神經(jīng)-內(nèi)臟神經(jīng)吻合后異類神經(jīng)再生過(guò)程中蛋白質(zhì)表達(dá)的時(shí)序性變化。 方法:通過(guò)雙向電泳和定量圖像分析對(duì)體神經(jīng)-內(nèi)臟神經(jīng)吻合后7，14，28天的異類神經(jīng)提取物進(jìn)行分析。用MALDI-TOF-MS對(duì)差異表達(dá)的蛋白質(zhì)進(jìn)行鑒定分析。 結(jié)論:體神經(jīng)和內(nèi)臟神經(jīng)吻合后異類