人臍血間充質(zhì)干細(xì)胞移植治療脊髓損傷的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目前認(rèn)為, 在不同組織中的間充質(zhì)干細(xì)胞(mesenchyme stem cells,MSCs)實(shí)際上可被視作不同組織中的成體干細(xì)胞(adult stem cells,ASCs).它可在體外培養(yǎng)條件下大量增殖,又能保持高度未分化狀態(tài).它具有多向分化潛能,在一定的誘導(dǎo)條件下可以定向分化為成骨細(xì)胞、成軟骨細(xì)胞、成肌細(xì)胞、脂肪細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞等.在合適的條件下,間充質(zhì)干細(xì)胞也可分化為神經(jīng)細(xì)胞. 近10年來,如何獲取大量的間充質(zhì)干細(xì)胞供

2、臨床使用成為干細(xì)胞研究的熱點(diǎn)之一.以往大量研究采用骨髓間質(zhì)干細(xì)胞(bone marrow mesenchyme stemcells),將其在體外誘導(dǎo)分化為神經(jīng)細(xì)胞,或用骨髓間質(zhì)干細(xì)胞移植入大鼠腦內(nèi),成功地促進(jìn)了腦卒中后神經(jīng)功能恢復(fù).但是,由于骨髓MSCs的來源有限且為有創(chuàng)性獲取;骨髓源性MSCs存在有致病因素影響的可能且隨著年齡增長其細(xì)胞數(shù)量、擴(kuò)增和分化能力出現(xiàn)明顯下降,故尋找一種能替代骨髓MSCs,并可彌補(bǔ)其缺陷的間充質(zhì)干細(xì)胞,同時(shí)也

3、為了獲得足夠數(shù)量的種子細(xì)胞,人們開始研究從人臍帶血中分離、培養(yǎng)具有多向分化潛能的間充質(zhì)干細(xì)胞的可能性及方法.而臍血和骨髓一樣都含有間質(zhì)干細(xì)胞,且人臍血間充質(zhì)干細(xì)胞(human umbilical cordblood mesenchyme stem cells,HUCBMSCs)可能更原始,增殖分化能力更強(qiáng),因此為細(xì)胞治療的來源又提供了一個(gè)新的選擇. 本實(shí)驗(yàn)通過對HUCBMSCs進(jìn)行分離、培養(yǎng)及擴(kuò)增.然后將HUCBMSCs植入脊髓

4、損傷(spinal cord injury,SCI)大鼠損傷部位,對植入和未植入HUCBMSCs的動(dòng)物組進(jìn)行行為學(xué)和組織學(xué)觀測,研究其治療脊髓損傷的效果. 目的:探討臍血間充質(zhì)干細(xì)胞應(yīng)用于脊髓損傷神經(jīng)修復(fù)的治療效果,為臍血間充質(zhì)干細(xì)胞修復(fù)脊髓損傷的臨床應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù). 方法: 1.無菌條件下收集足月產(chǎn)胎兒的臍帶血,經(jīng)肝素抗凝,用淋巴細(xì)胞分離液分離臍血單個(gè)核細(xì)胞,以Mesencult<'TM>作為培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)、

5、純化、擴(kuò)增,獲得MSCs; 2.取成年wistar大鼠46只,分別按"重物打擊脊髓損傷模型"方法建立脊髓損傷模型.隨機(jī)分為3組,損傷組(SCI)、假移植組(SCI+NS)、移植組(SCI+NS+HUCBMSCsl,前兩組15只,第三組16只,3組大鼠分別于損傷后第1天、1w、2w、4w進(jìn)行行為學(xué)評價(jià).行為學(xué)評分采用BBB(Basso--Beatie-Bresnehan,BBB)評分.第1w、4w行HE染色圖片觀察移植組和實(shí)驗(yàn)組的

6、炎癥反應(yīng)情況,第4w行免疫組化GFAP、NSE檢驗(yàn)細(xì)胞存活及分化情況. 結(jié)果: 來源于臍血的單個(gè)核細(xì)胞(MNcs)種植于特定的培養(yǎng)劑后,可以產(chǎn)生貼壁細(xì)胞,主要表現(xiàn)為破骨樣細(xì)胞和間充質(zhì)樣細(xì)胞;傳3代后,這些細(xì)胞可以得到純化和擴(kuò)增,表現(xiàn)為間充質(zhì)樣細(xì)胞.HUCBMSCs移植能促進(jìn)脊髓損傷大鼠后肢運(yùn)動(dòng)功能改善,2w后即可以看到明顯改善,4w時(shí)BBB評分有明顯提高.2w及4w移植組與損傷組和假移植組差異均有顯著性(P<0.05).