人臍血間充質(zhì)干細胞移植治療腦創(chuàng)傷大鼠的實驗研究.pdf

1、目的：本實驗通過對HUCBMSCs分離、培養(yǎng)，在體外熒光標記后植入腦創(chuàng)傷大鼠模型損傷區(qū)周圍，在移植后不同時間監(jiān)測HUCBMSCs在腦內(nèi)的生存、遷移、整合情況。并對移植組大鼠進行行為學(xué)評分和學(xué)習(xí)記憶能力的檢測，與對照組比較，免疫組織化學(xué)監(jiān)測分化情況。 方法：用密度梯度離心分離健康自然分娩產(chǎn)婦志愿捐獻的臍血單個核細胞(MNCs)，以含20％胎牛血清的DMEM/F12進行培養(yǎng)。培養(yǎng)24h后傾去全部液體以去除未貼壁細胞，以后每3d全量換

2、液一次，倒置顯微鏡下觀察細胞形態(tài)變化。移植前以熒光標記物Hoechst33258標記NSCs30min后備用。采用自由落體撞擊法制作大鼠腦創(chuàng)傷模型。Wistar大鼠90只，隨機分為4組：假損傷組、損傷組、假移植組和移植組，前三組各22只，移植組24只，4組大鼠分別于損傷后2d及7d進行大鼠行為學(xué)評分；于移植后2d和7d處死移植組大鼠各2只制作腦組織冰凍切片，在熒光顯微鏡下觀察移植細胞存活及遷移狀況；4組大鼠損傷后2w各處死2只，制備腦組

3、織切片行HE染色，計數(shù)額項葉皮層壞死神經(jīng)元；4組大鼠分別于損傷后2w和4w行Y迷宮試驗，檢測學(xué)習(xí)和記憶能力。取移植后2w和4w時大鼠腦組織切片行GFAP、NSE免疫組化染色，觀察移植細胞的分化情況。 結(jié)論：1.含15％～20％胎牛血清的DMEM/F12培養(yǎng)可在體外對HUCBMSCs進行培養(yǎng)，細胞生長良好。2.Hoechst33258標記的HUCBMSCs植入大鼠腦創(chuàng)傷模型腦內(nèi)后能夠存活，向損傷區(qū)遷移并與宿主腦組織融合在一起。HU