窒息大鼠心肺復(fù)蘇模型的改良及復(fù)蘇后大鼠腦組織AQP4表達(dá)變化的研究.pdf

1、第一部分窒息大鼠心肺復(fù)蘇模型的改良 目的：改良窒息大鼠心肺復(fù)蘇模型；探討心臟停搏持續(xù)時(shí)間對(duì)自主循環(huán)恢復(fù)后6h存活率和腦含水量的影響，為后續(xù)實(shí)驗(yàn)確定合適的心臟停搏時(shí)間。 方法：健康雄性SD大鼠36只，隨機(jī)分為4組：對(duì)照組(n=6)，CAlrain組、CA3min組、CA5min組，后三組每組均為10只。對(duì)照組僅予氣管切開插管、股動(dòng)、靜脈置管，手術(shù)后6h處死。其它各組予氣管切開插管、股動(dòng)、靜脈置管，呼氣末夾閉氣管導(dǎo)管模擬窒息

2、，心臟停搏(cardiac arrest，CA)持續(xù)1min、3min、5min后實(shí)施心肺復(fù)蘇，應(yīng)用心電監(jiān)護(hù)儀監(jiān)測(cè)三組大鼠心肺復(fù)蘇期間平均動(dòng)脈壓(mean arterial pressure，MAP)、心率(heart rate,HR)及體溫的動(dòng)態(tài)變化，股動(dòng)脈采血監(jiān)測(cè)血?dú)獾膭?dòng)態(tài)變化，并觀察三組大鼠自主循環(huán)恢復(fù)(restoration of spontaneous circulation,ROSC)時(shí)間、復(fù)蘇成功率及ROSC后6小時(shí)的存活

3、率及腦含水量(brain water content,BWC)。 結(jié)果：CA3min組的復(fù)蘇成功率、ROSC后6h存活率與CA5min組比較，有顯著性差異。CA3min組BWC與CA1min比較有顯著性差異(P<0.05)。 結(jié)論：1．改進(jìn)窒息大鼠心肺復(fù)蘇模型，改良后的模型更加穩(wěn)定，復(fù)蘇成功率和ROSC后6h存活率均顯著高于未改良前。 2．心臟停搏3min后復(fù)蘇成功率和ROSC后6h存活率均較高，ROSC后6h的

4、BWC增加明顯。利用窒息大鼠進(jìn)行心肺復(fù)蘇后腦水腫研究，可選擇3min為實(shí)驗(yàn)心臟停搏時(shí)間。 第二部分心肺復(fù)蘇后大鼠腦組織水通道蛋白-4及其mRNA的動(dòng)態(tài)變化和亞低溫對(duì)其影響的研究 目的：探討復(fù)蘇后早期腦水腫的變化規(guī)律，AQP4及其mRNA在腦水腫發(fā)生、發(fā)展中的作用，以及亞低溫減輕心肺復(fù)蘇后腦水腫的可能機(jī)制。 方法：雄性SD大鼠66只，隨機(jī)分為3組，分別為對(duì)照組、常溫復(fù)蘇組、亞低溫組，后兩組各自進(jìn)一步分為5個(gè)亞組，即

5、自主循環(huán)恢復(fù)后0．5、1、3、6和9小時(shí)組。建立窒息大鼠心肺復(fù)蘇模型，應(yīng)用干濕重法測(cè)定自主循環(huán)恢復(fù)后0．5、1、3、6和9小時(shí)腦組織含水量的變化；同時(shí)觀察各時(shí)間點(diǎn)腦組織形態(tài)學(xué)的變化。利用免疫組織化學(xué)染色半定量分析的方法，檢測(cè)相同觀察時(shí)點(diǎn)腦組織AQP4表達(dá)水平的變化。運(yùn)用RT-PCR方法檢測(cè)腦組織AQP4mRNA表達(dá)的變化，分析AQP4、AQP4mRNA與BWC的相關(guān)性。 結(jié)果：1．常溫組大鼠，ROSC后0.5hBWC開始增加，隨

6、著時(shí)間的延長(zhǎng)BWC明顯增加，各觀察時(shí)點(diǎn)BWC與對(duì)照組比較，均有顯著性差異(P值<0.05)。腦組織形態(tài)學(xué)的變化與以上結(jié)果相符。同時(shí)，復(fù)蘇后腦組織．AQP4蛋白水平、AQP4mRNA的表達(dá)，也呈現(xiàn)出與BWC變化幾乎相同的趨勢(shì)。相關(guān)分析表明，BWC與腦組織AQP4、AQP4mRNA水平表達(dá)呈明顯正相關(guān)，相關(guān)系數(shù)(r)分別為0.847和0.771，(P<0.01)。 2．ROSC后0.5小時(shí)，亞低溫組大鼠BWC和腦組織AQP4表達(dá)水平

7、與常溫組同一觀察時(shí)點(diǎn)比較無明顯變化；亞低溫作用1h、3h、6h和9h時(shí)，上述指標(biāo)均較相同觀察時(shí)點(diǎn)常溫復(fù)蘇組明顯降低(P值均<0.05)。相關(guān)分析表明，亞低溫作用9h內(nèi)，BWC與腦組織AQP4、AQP4mRNA表達(dá)水平呈明顯正相關(guān)，r分別為0.769和0.780，(p<0.01)。 結(jié)論：1．心肺復(fù)蘇后0.5h已出現(xiàn)腦水腫，并隨著ROSC時(shí)間點(diǎn)的延長(zhǎng)，腦水腫逐漸加重。 2．腦組織AQP4及其mRNA在ROSC后0.5h表達(dá)