免疫介導(dǎo)再生障礙性貧血小鼠干擾素-γ與蛋白激酶C-θ表達(dá)及其意義.pdf

1、目的：在再生障礙性貧血(aplastic anemia，AA)的發(fā)生和發(fā)展中，免疫調(diào)節(jié)紊亂尤其是免疫介導(dǎo)的T淋巴細(xì)胞異常免疫是導(dǎo)致造血功能衰竭的重要病理機(jī)制。本研究通過(guò)觀察免疫介導(dǎo)再生障礙性貧血(AA)小鼠外周血單個(gè)核細(xì)胞(PBMC)中干擾素-γ(IFN-γ)、蛋白激酶C-θ(PKC-θ)表達(dá)及小鼠脾臟IFN-γ表達(dá)，探討PKC-θ與AA免疫發(fā)病機(jī)制的關(guān)系。
　　 方法：
　　 (1)采用免疫介導(dǎo)方法建立(60Co-γ射

2、線照射后輸入淋巴細(xì)胞)AA小鼠模型。
　　 將Balb/c小鼠給以60Co-γ射線5.5Gy全身照射。照射后2小時(shí)經(jīng)小鼠尾靜脈輸入DBA/2小鼠胸腺、淋巴結(jié)混合細(xì)胞懸液(濃度5×106/ml)0.2ml。飼養(yǎng)于無(wú)菌環(huán)境下。瀕死或第12天取外周血進(jìn)行血常規(guī)和網(wǎng)織紅細(xì)胞檢查，并進(jìn)行骨髓活檢，判定模型成功與否。
　　 (2)造模成功后，用逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)法檢測(cè)小鼠外周血單個(gè)核細(xì)胞中IFN-γmRNA的表達(dá)，

3、對(duì)結(jié)果進(jìn)行半定量分析。
　　 (3)用RT-PCR法檢測(cè)小鼠外周血單個(gè)核細(xì)胞中PKC-θmRNA的表達(dá)，對(duì)結(jié)果進(jìn)行半定量分析。
　　 (4)對(duì)IFN-γmRNA和PKC-θmRNA的表達(dá)水平進(jìn)行相關(guān)性分析。
　　 (5)對(duì)PKC-θmRNA的表達(dá)和外周血細(xì)胞數(shù)量進(jìn)行相關(guān)性分析。
　　 (6)用免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)AA小鼠脾臟組織石蠟切片中IFN-γ蛋白表達(dá)水平，以每個(gè)視野內(nèi)的陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)量作為IFN-γ蛋白

4、的量化指標(biāo)，進(jìn)行陽(yáng)性細(xì)胞率分析。
　　 (7)統(tǒng)計(jì)方法：所有資料處理用SPSS16.0軟件包進(jìn)行分析，檢測(cè)結(jié)果以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，經(jīng)方差齊性檢驗(yàn)后，用t檢驗(yàn)比較兩組間的差異。用簡(jiǎn)單直線相關(guān)分析探討兩因素之間相關(guān)關(guān)系。
　　 結(jié)果：
　　 (1)AA小鼠外周血常規(guī)及網(wǎng)織紅細(xì)胞檢測(cè)顯示全血細(xì)胞減少，骨髓活檢顯示骨髓造血細(xì)胞明顯減少，非造血細(xì)胞增多。造模成功。
　　 (2)RT-PCR結(jié)果顯示AA小鼠PBMC中

5、IFN-γmRNA表達(dá)高于正常小鼠(1.14±0.06vs0.73±0.11，P＜0.05)。
　　 (3)RT-PCR結(jié)果顯示AA小鼠PBMC中PKC-θmRNA表達(dá)高于正常小鼠(1.21±0.74vs0.48±0.48，P＜0.05)。
　　 (4)相關(guān)性分析顯示AA小鼠PBMC中IFN-γ與PKC-θ表達(dá)呈正相關(guān)(r值0.655，P＜0.05)。
　　 (5)相關(guān)性分析顯示AA小鼠PKC-θmRNA與WBC

6、、PLT、RC表達(dá)呈負(fù)相關(guān)(r值分別為-0.657、-0.714和-0.766)，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P值均＜0.05)；PKC-θmRNA與RBC、Hb表達(dá)無(wú)明顯線性關(guān)系。
　　 (6)免疫組化結(jié)果顯示AA小鼠脾臟組織中IFN-γ蛋白陽(yáng)性率(4.55±0.60)％高于正常小鼠(0.82±0.25)％，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。
　　 結(jié)論：AA小鼠PBMC中IFN-γmRNA和PKC-θmRNA表達(dá)均增高，AA小鼠脾臟組