CTLA4-Ig的表達、修飾和腫瘤免疫治療策略性研究.pdf

1、軍事醫(yī)學科學院博士后研究工作報氣V∥81960墨cTLA4Ig的表達、修飾和腫瘩免疫治療策略性研究合作導師：沈倍奩院士黎燕研究員郭寧研究員博士后：干繼云專業(yè)：分子免疫學流動站名稱：工作起始日期：完成日期：報告日期：單位名稱：軍事醫(yī)學科學院基礎(chǔ)醫(yī)學流動站1999，92002，12002，1軍事醫(yī)學科學院基礎(chǔ)醫(yī)學研究所現(xiàn)在瓣硬變認為，瓣訣闋釋異體移攘捺斥反應(yīng)魄綴娃途徑是誘導移植受體產(chǎn)生針對移植抗原的特異鏈免疫辯受，僵至今在該領(lǐng)域尚未肖突破性

2、進展。本研究提出了誘導供者特弗性免疫抑制及耐受的新設(shè)想和新機制?；舅悸肥牵贺杌蛩旖M的方法，將cTLA4Ig與介導袋蛋白的翻譯后糖目旨修飾的信號肽部分融合，表達于適當?shù)乃拗骷毎?，表達后形成GPI修怖的嵌合蛋白(GPI—CTLA4Ig)，嵌合器白經(jīng)縫化屠用予處理移植物細胞，一方顙逶過封閉移檀物細胞上的B7分子而逃避受體宿主的免疫抑制；另一方面，由于移植物中的T細胞表露通過GPI嵌合了一定數(shù)量的CTLA4Ig兩優(yōu)先與密主緞胞上的B7分子結(jié)

3、合，阻顴了宿主抗原對移攮物中T纓胞的激活，從兩W有效抑制移植物抗宿主反應(yīng)。本磅究奩已獲得CTLA4基聯(lián)的基否出上，用基囂重組豹方法，將從衰變期速因子(DAF)來源的GPI信號肽融合于CTLA4Ig的羧基端，構(gòu)建了GPIcTLA4Ig嵌合分子。將嵌食分子究隆到具有二氫葉酸還原酶篩選標記基因的真核表達載體pcIdh心中，在二氫葉陵還原酶缺陷的cHO細胞中獲得了穩(wěn)定表達，經(jīng)細胞免疫熒光檢測證實，表達的GPICTLA4Ig嵌合分予，主要整合在細

4、胞膜上，兩分泌型的￡T乙醚艷劉主要表達在纓胞漿中，拐步說瞞GpI償母膠起翻了應(yīng)有豹作用。本磷究將嵌臺性GPI，C甩A4Ig章每建到食二氫咔酸還原薅(強蠹)鮑囊核襲這載體pcI魏盤蘑，轉(zhuǎn)染dh矗缺陷的cH0細胞系，熠MTX加壓篩選后，用細胞免疫熒光染色的方法發(fā)現(xiàn)，有的纓胞膜上融合蛋囪的表達燕很離。經(jīng)過適當豹克隆篩選，有可能獲得離表達的緞臆株。我們將細臆大量擴增培養(yǎng)，從5l妒細胞中，可大約得到lmg的GPI錨定蛋自。我們下一步的工作，將要探