Toll樣受體4激活對海馬神經(jīng)元興奮性突觸發(fā)育的影響及機制研究.pdf

1、目的:探索Toll樣受體4(Toll-like receptor4，TLR4)激活介導(dǎo)的信號通路對小鼠海馬神經(jīng)元樹突樹和興奮性突觸發(fā)育的影響，闡釋先天性免疫反應(yīng)對海馬神經(jīng)元發(fā)育的影響。
　　方法:建立小鼠原代海馬神經(jīng)元(hip)單純培養(yǎng)以及星形膠質(zhì)細胞-海馬神經(jīng)元(as-hip)共培養(yǎng)的模型，分別在體外培養(yǎng)（days in vitro）不同時間段(DIV8-10，DIV10-12和DIV13-15)的海馬神經(jīng)元中加入脂多糖(lip

2、opolysaccharide，LPS，1μg/ml)，通過免疫細胞化學(xué)（immunocytochemistry，ICC）和激光共聚焦成像技術(shù)檢測TLR4激活對小鼠海馬神經(jīng)元樹突樹的發(fā)育和興奮性突觸生成的影響，并用western blot技術(shù)分別檢測共培養(yǎng)系統(tǒng)中星形膠質(zhì)細胞和神經(jīng)元的TLR4激活后相關(guān)蛋白表達的變化，初步探討參與TLR4激活影響神經(jīng)元發(fā)育的可能信號通路。
　　結(jié)果:
　　1）LPS處理(DIV13-15)成功

3、激活星形膠質(zhì)細胞和海馬神經(jīng)元的TLR4;
　　2)在DIV13-15時段，LPS能顯著增加共培養(yǎng)系統(tǒng)中海馬神經(jīng)元樹突棘和興奮性突觸密度，但對單純培養(yǎng)的海馬神經(jīng)元樹突樹和興奮性突觸發(fā)育沒有影響;
　　3）LPS增加與星形膠質(zhì)細胞共培養(yǎng)海馬神經(jīng)元樹突樹各級分支的長度和數(shù)量;
　　4）LPS處理引起共培養(yǎng)體系中海馬神經(jīng)元突觸后密度蛋白95(postsynaptic density95，PSD95)蛋白表達增加，但不影響單純培

4、養(yǎng)海馬神經(jīng)元PSD95蛋白表達;
　　5）LPS處理后星形膠質(zhì)細胞膠質(zhì)纖維酸性蛋白（glial fibrillary acidic protein，GFAP）表達無顯著改變;
　　6）LPS處理后，共培養(yǎng)的星形膠質(zhì)細胞髓樣分化因子88(myeloid differentiation factor88，MyD88)表達增加;但對單純培養(yǎng)和共培養(yǎng)神經(jīng)元的MyD88表達均無影響。
　　結(jié)論:上述研究結(jié)果表明，LPS激活TLR