細(xì)胞內(nèi)IL-1α調(diào)控沙眼衣原體誘導(dǎo)IL-8產(chǎn)生機(jī)制研究.pdf

1、沙眼衣原體(Chlamydia trachomatis，Ct)是重要的性傳播疾病病原體，Ct感染可引起宮頸炎、輸卵管炎和盆腔炎，并導(dǎo)致流產(chǎn)、異位妊娠、不孕等嚴(yán)重后遺癥。Ct感染可刺激上皮細(xì)胞產(chǎn)生大量炎性細(xì)胞因子，參與調(diào)節(jié)宿主的防御作用。促炎細(xì)胞因子IL-1α是機(jī)體抵抗感染的重要炎性介質(zhì)，其可誘導(dǎo)自身(IL-1α)、IL-6和IL-8等炎癥因子的產(chǎn)生。
　　目的:探討細(xì)胞內(nèi)IL-1α在沙眼衣原體早期誘導(dǎo)IL-8產(chǎn)生中的重要作用;Ha

2、x-1蛋白與IL-1α相互作用調(diào)控沙眼衣原體感染誘導(dǎo)IL-8產(chǎn)生，探討Ct感染時(shí)細(xì)胞內(nèi)IL-1α參與IL-8產(chǎn)生調(diào)控的分子機(jī)制。
　　方法:
　　1.ELISA、細(xì)胞免疫熒光檢測(cè)沙眼衣原體感染誘導(dǎo)的炎癥因子的產(chǎn)生和定位，復(fù)蘇已建立的單克隆穩(wěn)定細(xì)胞系，ELISA方法篩選出內(nèi)源性IL-1α沉默效果最佳的HeLa229穩(wěn)定細(xì)胞系。
　　2.構(gòu)建pro-IL-1α全長(zhǎng)質(zhì)粒并轉(zhuǎn)染穩(wěn)定細(xì)胞系，ELISA檢測(cè)外源性IL-1α對(duì)沙眼衣

3、原體誘導(dǎo)促炎性細(xì)胞因子IL-8產(chǎn)生的影響。
　　3.Western blot和細(xì)胞免疫熒光檢測(cè)Ct感染后Hax-1在HeLa229細(xì)胞中的表達(dá)及亞細(xì)胞定位細(xì)胞，免疫熒光檢測(cè)Ct感染后Hax-1和IL-1α的共定位;
　　4.利用siRNA技術(shù)下調(diào)HeLa229細(xì)胞Hax-1的表達(dá)，ELISA檢測(cè)Hax-1沉默對(duì)Ct感染后IL-8產(chǎn)生的影響。
　　結(jié)果:
　　1.Ct感染HeLa229細(xì)胞后44h可產(chǎn)生炎癥細(xì)胞因子

4、IL-1α和IL-8，其中IL-1α主要表達(dá)于細(xì)胞內(nèi)，IL-8則主要分泌于細(xì)胞外。
　　2.細(xì)胞免疫熒光檢測(cè)到Ct感染后IL-1α入核，同時(shí)伴有IL-8的產(chǎn)生。
　　3.篩選出內(nèi)源性IL-1α沉默效果最佳的HeLa229穩(wěn)定細(xì)胞株S2C2，沉默效率約79％，Ct感染后44h，與空質(zhì)粒載體轉(zhuǎn)染細(xì)胞相比，S2C2穩(wěn)定細(xì)胞培養(yǎng)上清IL-8的表達(dá)顯著降低。
　　4.將pro-IL-1α基因全長(zhǎng)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染S2C2穩(wěn)定細(xì)胞株，ELI

5、SA檢測(cè)結(jié)果證實(shí)S2C2細(xì)胞可以表達(dá)外源性pro-IL-1α，Ct感染S2C2細(xì)胞后外源性IL-1α誘導(dǎo)促炎因子IL-8的表達(dá)。
　　5.Western blot實(shí)驗(yàn)證明Ct感染HeLa229細(xì)胞48h，Hax-1表達(dá)顯著增高。
　　6.免疫熒光實(shí)驗(yàn)證明Ct刺激44h時(shí)IL-1α、Hax-1有共入核現(xiàn)象，利用siRNA技術(shù)沉默Hax-1基因的表達(dá)對(duì)Ct感染誘導(dǎo)的IL-8產(chǎn)生無(wú)影響。
　　結(jié)論:
　　1.Ct感染早