間接免疫熒光法篩選抗呼吸道合胞病毒單克隆抗體及其性質的初步鑒定.pdf

1、目的:人呼吸道合胞病毒(Human Respiratory Syncytial Virus,RSV)是造成世界范圍內嬰幼兒嚴重下呼吸道感染最重要的病毒病原,同時也可導致老年人、免疫功能低下者嚴重的呼吸道感染。病毒感染機體后的免疫保護機制尚未明確,也無特異性防治方法。融合糖蛋白(fusion glycoprotein,F)與黏附糖蛋白(attachment glycoprotein,G)為RSV的兩個中和抗原,都可誘導機體產生中和抗體。R

2、SV疫苗及以預防為目的的單克隆抗體的研發(fā)常以這兩個蛋白為重要的靶蛋白。在前期研究中,本課題組已采用間接ELISA法篩選出針對RSV F蛋白線性表位205-222位氨基酸的單克隆抗體。本研究嘗試進一步利用活體骨髓瘤細胞與雜交瘤技術,采用間接免疫熒光分析法(indirect immunoflurescence assay,IFA)篩選出更多可識別RSV的單克隆抗體,并對其體外性質進行鑒定,以期為RSV的被動免疫治療以及臨床診斷奠定基礎。

3、r>　　方法:以RSV通過滴鼻途徑免疫小鼠,同時,采用實體瘤技術體內制備骨髓瘤細胞。取免疫后小鼠的脾細胞與骨髓瘤細胞進行細胞融合,利用IFA方法篩選經有限稀釋法亞克隆獲得的可穩(wěn)定分泌抗RSV單克隆抗體(Monoclonal antibody,McAb)的雜交瘤細胞株。通過間接ELISA和Western blot等方法初步分析McAb對RSV蛋白的特異性結合能力,通過免疫酶法(Immunoenzyme,IM)中和保護實驗和融合抑制實驗分析

4、McAb體外保護作用。
　　結果:獲得四株穩(wěn)定分泌抗RSV單克隆抗體的雜交瘤細胞株,分別為2A7、3E10、1F10及3G4,經間接ELISA以及Western blot初步鑒定,獲得的四株單克隆抗體可特異性識別RSV蛋白,McAbs2A7和3E10可分別識別F蛋白二聚體和單體,McAbs1F10和3G4可識別G蛋白。其中McAbs2A7與1F10可以在體外抑制RSV對HEp-2細胞的感染,具有中和活性,同時具有融合抑制活性。