MicroRNA-494過(guò)表達(dá)與RNA干擾抑制survivin基因?qū)η傲邢侔┮浦擦錾L(zhǎng)的影響.pdf

1、目的：
　　 采用過(guò)表達(dá)microRNA-494腺病毒載體（Ad-pre-microRNA-494）與負(fù)載survivin shRNA腺病毒載體(Ad-survivin shRNA)抑制人前列腺癌PC-3細(xì)胞中survivin基因的表達(dá)，研究其對(duì)裸鼠前列腺癌移植瘤生長(zhǎng)影響。
　　 方法：
　　 采用本課題小組前期已成功構(gòu)建并被證實(shí)可過(guò)表達(dá)microRNA-494的腺病毒載體Ad-pre-microRNA-494(

2、簡(jiǎn)稱(chēng)Ad-494)及負(fù)載survivin shRNA腺病毒載體Ad-survivin shRNA(簡(jiǎn)稱(chēng)Ad-sur)分別感染HEK-293T細(xì)胞，并用該細(xì)胞進(jìn)行病毒純化、效價(jià)測(cè)定及感染效率測(cè)定。PC-3細(xì)胞進(jìn)行相應(yīng)分組轉(zhuǎn)染處理后，進(jìn)行裸鼠皮下移植，每只裸鼠接種細(xì)胞數(shù)量約為1×107，裸鼠分組如下：PBS組、Ad-GFP組（空載體組）、Ad-sur組、Ad-494組、Ad-sur+Ad-494組，每組5只。建立移植瘤模型，動(dòng)態(tài)測(cè)量腫瘤體積

3、及其生長(zhǎng)變化的時(shí)間曲線(xiàn)。55天后處死各組裸鼠，瘤體稱(chēng)重、計(jì)算瘤重抑瘤率；瘤塊HE染色法觀(guān)察腫瘤細(xì)胞形態(tài)；Western blot檢測(cè)移植瘤腫瘤中survivin基因的表達(dá)變化情況；免疫組化測(cè)定survivin蛋白及Bax、Bcl-2、p53、Caspase-3等凋亡相關(guān)因子的表達(dá)變化情況。
　　 結(jié)果：
　　 體外獲得高純度、高表達(dá)的各組腺病毒，其效價(jià)可達(dá)109pfu/ml，以50MOI作為腺病毒感染PC-3細(xì)胞的最佳感

4、染劑量；裸鼠皮下移植瘤實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：Ad-sur組、Ad-494組、Ad-sur+Ad-494組前列腺癌裸鼠移植瘤的生長(zhǎng)明顯被抑制，并且Ad-sur+Ad-494組效果較Ad-sur組、Ad-494組更為顯著(P＜0.05)，具有抑瘤增效的相加作用(Q=0.99)。免疫組化、Western blot，檢測(cè)各組survivin基因的表達(dá)結(jié)果顯示：Ad-sur組、Ad-494組、Ad-sur+Ad-494組的survivin基因表達(dá)下降，與

5、PBS組、Ad-GFP組相比具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，而Ad-494、Ad-sur組間無(wú)明顯差異，Ad-sur+Ad-494組較Ad-494、Ad-sur更為顯著；免疫組化檢測(cè)凋亡相關(guān)因子結(jié)果顯示：Ad-sur組、Ad-494組、Ad-sur+Ad-494組的Bax、p53、Caspase-3表達(dá)上調(diào)，Bcl-2表達(dá)下調(diào)，且Ad-sur+Ad-494組效果優(yōu)于A(yíng)d-sur組、Ad-494組。
　　 結(jié)論：
　　 過(guò)表達(dá)microR

6、NA-494腺病毒載體Ad-pre-microRNA-494與負(fù)載survivinshRNA腺病毒載體Ad-survivin shRNA均能有效地抑制survivin基因表達(dá)、抑制裸鼠前列腺移植瘤的生長(zhǎng)，且二者聯(lián)合效果更加顯著，提示多靶點(diǎn)抑制單基因更有效，這可能成為晚期前列腺癌基因治療的新的方法；microRNA-494下調(diào)survivin基因、抑制裸鼠前列腺移植瘤的生長(zhǎng)可能與Bax、p53、Caspase-3的上調(diào)及Bcl-2下調(diào)有關(guān)