RNA干擾沉默SATB1基因影響前列腺癌細胞增殖和侵襲的實驗研究.pdf

1、目的：利用RNA干擾(RNAi)技術(shù)沉默SATB1基因的表達，研究其對人前列腺癌DU145細胞增殖和侵襲的影響，為前列腺癌的基因治療提供實驗基礎(chǔ)。
　　 方法：1.SATB1shRNA轉(zhuǎn)錄模板DNA鏈的設(shè)計、合成按siRNA設(shè)計原則，設(shè)計針對SATB1基因cDNA序列的siRNA。再根據(jù)siRNA序列設(shè)計總長度為63bp的shRNA轉(zhuǎn)錄模板DNA正、反義鏈二條。
　　 2.shRNA表達質(zhì)粒pSilencer3.1-SA

2、TB1的構(gòu)建將等量的將正、反義二條轉(zhuǎn)錄shRNA對應(yīng)模板的DNA序列，退火處理后克隆至pSilencer3.1。重組質(zhì)粒命名為pSilencer3.1-SATB1。
　　 3．用LipofectamineTM2000將pSilencer3.1-SATB1轉(zhuǎn)染人前列腺癌DU145細胞，以空質(zhì)粒pSilencer3.1及未轉(zhuǎn)染的細胞作對照。在轉(zhuǎn)染后24h、48h、72h收集樣本，采用RT-PCR檢測SATB1mRNA表達、Weste

3、rnblot檢測SATB1蛋白表達、MTT方法檢測細胞的增殖，Transwell實驗檢測細胞的侵襲能力。
　　 結(jié)果：1.PCR及測序鑒定表明質(zhì)粒pSilencer3.1-SATB1構(gòu)建成功。
　　 2．轉(zhuǎn)染pSilencer3.1-SATB1后24h、48h、72h,DU145細胞SATB1mRNA表達水平（53.0±4.0、49.3±3.1、34.1±4.3）％均顯著低于空質(zhì)粒pSilencer3.1、未轉(zhuǎn)染的細胞（

4、94.0±1.7,100）％；經(jīng)蛋白印跡檢測DU145細胞SATB1蛋白水平為（56.3±3.7、47.0±3.9、31.4±9.0）％均顯著低于兩對照組（94.0±3.5,100）％;DU145細胞的相對抑制率分別為（53.2±5.8、62.3±4.0、76.7±2.9）％均顯著低于兩對照組（7.0±1.5、0）％;Transwell侵襲實驗結(jié)果顯示，轉(zhuǎn)染pSilencer3.1-SATB1組侵襲細胞數(shù)為34.2±4.2，顯著低于兩對