體外抑制哮喘患者炎性細(xì)胞因子生成作用的研究.pdf

1、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?輔助性T細(xì)胞(T helper cell,Th)亞群(Th1/Th2)的功能失衡是哮喘發(fā)病的重要機(jī)制之一,Th2功能相對(duì)增強(qiáng)而導(dǎo)致IL-4、IL-5、IL-13產(chǎn)生量增多,引發(fā)一系列哮喘免疫級(jí)聯(lián)反應(yīng):氣道平滑肌收縮、嗜酸性粒細(xì)胞浸潤(rùn)、Ig合成增加及氣道高反應(yīng)等.Th2型細(xì)胞因子在哮喘的發(fā)病過(guò)程中發(fā)揮重要作用,哮喘炎性細(xì)胞因子主要是Th2型細(xì)胞因子或由其誘導(dǎo)而產(chǎn)生,因此抑制Th2型細(xì)胞因子的生成是有效阻斷哮喘患者氣道及肺組織炎癥

2、的重要方面.茶堿的安全有效濃度為10-20mg/L,5-10mg/L屬于低濃度范圍<'[1]>.我們觀察低劑量茶堿對(duì)哮喘患者輔助性T淋巴細(xì)胞(CD+4T)的分化和炎性細(xì)胞因子分泌的影響.抗CD86單抗通過(guò)阻斷抗原遞呈細(xì)胞和CD<'+><,4>T之間的共刺激信號(hào)傳導(dǎo)途徑,使哮喘患者CD<'+><,4>T不能被有效活化,從而降低了炎性細(xì)胞因子的分泌.我們通過(guò)兩個(gè)相互獨(dú)立的實(shí)驗(yàn)從體外觀察茶堿及抗CD86單抗對(duì)哮喘炎性細(xì)胞因子生成作用的影響,探

3、討它們不同的抗炎機(jī)制.實(shí)驗(yàn)材料及方法1.材料:塵螨變應(yīng)原;茶堿;CD4-FIFC單抗和PE-抗人IL-4及IFN-γ抗體;抗CD86單抗;CD4<'+>T免疫磁珠分離系統(tǒng);胎牛血清;RPMI Medium 1640;細(xì)胞培養(yǎng)箱;IL-4、IL-5、IFN-γ雙抗體夾心ELISA試劑盒;酶標(biāo)儀;流式細(xì)胞儀.2.方法:實(shí)驗(yàn)1:取哮喘患者外周血分離出單核細(xì)胞和CD4<'+>T細(xì)胞,單核細(xì)胞被塵螨變應(yīng)原刺激活化后與CD4<'+>T分別在茶堿5m

4、g/L和10mg/L兩個(gè)濃度下共培養(yǎng),于72小時(shí)后收集培養(yǎng)上清,ELISA法檢測(cè)相應(yīng)細(xì)胞因子生成量,培養(yǎng)細(xì)胞用熒光標(biāo)記單克隆抗體染色,流式細(xì)胞儀檢測(cè)Th細(xì)胞內(nèi)特異性細(xì)胞因子.實(shí)驗(yàn)2:分別從10例塵螨過(guò)敏性哮喘患者支氣管肺泡灌洗液(BALF)和外周血中分離出肺泡巨噬細(xì)胞(AM)和CD4<'+>T細(xì)胞,AM經(jīng)螨變應(yīng)原的刺激活化后與CD4<'+>T共培養(yǎng).實(shí)驗(yàn)組分別加抗CD86單抗至:0.1mg/L和1ing/L兩個(gè)劑量,對(duì)照組不加相應(yīng)抗體.