去甲斑蝥素誘導(dǎo)結(jié)腸癌LS-174T細(xì)胞凋亡及其作用機(jī)制.pdf

1、河北醫(yī)科大學(xué)學(xué)位論文使用授權(quán)及知識(shí)產(chǎn)權(quán)歸屬承諾篡器一學(xué)荔◆河北醫(yī)科大學(xué)研究生學(xué)位論文獨(dú)創(chuàng)性聲明本論文是在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作及取得的研究成果，除了文中特別加以標(biāo)注和致謝等內(nèi)容外，文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫的研究成果，指導(dǎo)教師對(duì)此進(jìn)行了審定。本論文由本人獨(dú)立撰寫，文責(zé)自負(fù)。堿蜷轢產(chǎn)導(dǎo)師簽章：“mt甲年歲月27日中文摘要去甲斑蝥素誘導(dǎo)結(jié)腸癌LS174T細(xì)胞凋亡及其作用機(jī)制摘要目的：以人結(jié)腸癌LS174T細(xì)胞為研究對(duì)象，探討去甲斑蝥素

2、誘導(dǎo)人結(jié)腸癌LS174T細(xì)胞凋亡的作用及其分子機(jī)制，為結(jié)腸癌的治療提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。方法：將人結(jié)腸癌細(xì)胞株LS174T細(xì)胞于以含10％胎牛血清、lOOu／ml青霉素和lOOug／m!鏈霉素的RPMll640培養(yǎng)基于溫度37℃5％C02溫箱中培養(yǎng)，待細(xì)胞貼壁，取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞進(jìn)行試驗(yàn)。采用以下實(shí)驗(yàn)：1MTT法檢測(cè)去甲斑蝥素對(duì)LS174T細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制作用取生長(zhǎng)對(duì)數(shù)期的LS174T細(xì)胞，將其消化成單細(xì)胞懸液，調(diào)整細(xì)胞終濃度為lxl05／ml，接

3、種于96孔培養(yǎng)板中，分另UJJn入質(zhì)量濃度為5、10、20和40ug／nfl的去甲斑蝥素培養(yǎng)，同時(shí)設(shè)空白組(DMSO溶劑對(duì)照組)和陰性對(duì)照組(不加藥物組)。加藥作用24、48、72h，每孔加入20ulMTT(5mg／m1)，于培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)4h，棄上清液，Ascent酶標(biāo)儀檢測(cè)D490值，計(jì)算細(xì)胞生長(zhǎng)抑制率，繪制出細(xì)胞生長(zhǎng)曲線。2熒光顯微鏡下細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察將對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的LS174T細(xì)胞消化，接種于6孔板中進(jìn)行爬片，培養(yǎng)24h待細(xì)胞貼壁

4、生長(zhǎng)后，棄去培養(yǎng)液，分別加入質(zhì)量濃度為10、40ug／ml的去甲斑蝥素，同時(shí)設(shè)陰性對(duì)照組，培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)24h后，迅速置于熒光顯微鏡下觀察，并拍照。3透射電子顯微鏡觀察細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)的變化收集0、10、40ug／ml去甲斑蝥素作用24h后的結(jié)腸癌LS174T細(xì)胞離心10min，沿管壁加入25％的戊二醛，4“C保存，加入1％的鋨酸4“C固定，用梯度丙酮脫水，用Epon618純化樹脂浸透，包埋，烤箱中聚合后，用Leica超薄切片機(jī)制成切片，