精原細胞介導(dǎo)法制備轉(zhuǎn)基因綿羊以及后代肉品質(zhì)測定.pdf

1、骨骼肌是目前肉羊育種中的重要經(jīng)濟性狀，成肌調(diào)節(jié)因子(Myogenic regulatory factors，MRFs)負責(zé)調(diào)控整個骨骼肌的發(fā)生過程，MyoG是MRFs家族中唯一在所有骨骼肌細胞中均有表達的基因，在中胚層成肌細胞遷移至靶組織及完成增殖后肌管的形成過程中起調(diào)控作用，其成肌分化作用是其它MRFs家族成員無法代替的。本研究通過精原細胞介導(dǎo)法制備MyoG綿羊并對轉(zhuǎn)基因后代進行肉質(zhì)分析，旨在驗證該方法制備轉(zhuǎn)基因綿羊的可行性，同時也為

2、生產(chǎn)實踐提供參考依據(jù)，為社會帶來一定的經(jīng)濟效益。
　　首先，通過精原細胞介導(dǎo)法，將攜帶有MyoG的重組載體轉(zhuǎn)入3只第一批成年公羊睪丸內(nèi)，單側(cè)注射。注射40天后，摘取公羊睪丸，從附睪中采集精液，通過對綿羊精液涂片檢查、睪丸切片觀察、精子基因組DNA經(jīng)PCR檢測、精子總蛋白經(jīng)Western blot檢測，發(fā)現(xiàn)基因轉(zhuǎn)染效率可達到30％，初步驗證通過精原細胞介導(dǎo)法可以高效的將外源基因MyoG轉(zhuǎn)進綿羊精子中。
　　基于上述成熟的方法體

3、系，再次注射3只公羊，然后分別將公羊放入三個母羊圈中，每個圈大約10頭母羊，進行自然交配，獲得48頭G1代羔羊，經(jīng)過DNA和蛋白水平檢測，最終獲得1頭轉(zhuǎn)基因個體，陽性率為2.08％，將后代進行屠宰，對后代的屠宰性能、肉品質(zhì)以及肌肉纖維數(shù)等指標(biāo)進行測定，發(fā)現(xiàn)MyoG過表達綿羊的肌纖維數(shù)高于對照組，而且屠宰性能跟陰性個體相比也有所提高，通過對肌肉的肉色、pH值、剪切力、蒸煮損失等指標(biāo)進行測定，發(fā)現(xiàn)MyoG過表達綿羊的肉品質(zhì)與陰性個體相比也有