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文檔簡介
1、目的:建立具有輻射抗拒性食管癌細胞系TE-1R,初步探討輻射抗性的食管癌細胞系TE-1R的輻射抗性與RPA1的關系。研究輻射抗性食管癌細胞系TE-1R的增殖抑制率、凋亡率,初步探討TE-1R輻射抗性的機理。觀察RPA1 mRNA和蛋白在人食管癌細胞TE-1和TE-1R中的表達情況,為以RPA1為靶點的分子靶向放療增敏提供體外實驗研究依據(jù)。
方法:分次、間歇照射的方法(2Gy5次)誘導人食管癌細胞系TE-1產(chǎn)生具有穩(wěn)定輻射抗拒性
2、的細胞亞系TE-1R,在倒置顯微鏡下觀察其細胞形態(tài)學差異。分別以TE-1R、TE-1為實驗組和對照組,給予6MVX射線單次照射2 Gy,用噻唑藍(MTT)比色法檢測實驗組和對照組細胞的增殖抑制;采用流式細胞儀(FACS)檢測實驗組和對照組細胞凋亡率;采用westernblot檢測實驗組和對照組的細胞RPA1蛋白表達水平;采用逆轉錄-聚合酶鏈反應(RT-PCR)檢測實驗組和對照組細胞中RPA1 mRNA表達水平。
結果:利用X線
3、間歇、多次照射食管癌細胞TE-1,篩選出在形態(tài)學及放射生物學參數(shù)都穩(wěn)定的放射抗拒性食管癌細胞系TE-1R;2 Gy射線照射后,TE-1R細胞的增殖抑制率低于TE-1細胞,TE-1R的倍增時間長于TE-1的倍增時間,2Gy照射后12h、24h和48 h TE-1R細胞的凋亡率低于TE-1的凋亡率,其差異具有顯著性(P<0.05)。RPA1 mRNA及其蛋白在食管癌TE-1細胞中均有表達,Western blot結果顯示:對照組RPA1蛋白
4、表達較高(0.42±0.011)%,實驗組RPA1蛋白表達較對照組高(0.89±0.017)%,統(tǒng)計學有顯著性差異(P<0.05)%。RT-PCR結果顯示:對照組RPA1mRNA表達較弱(0.65±0.012)%,實驗組RPA1 mRNA表達較對照組較高(0.89±0.018)%,其差異具有顯著性(P<0.05)。
結論:1.成功的建立了輻射抗性的食管癌細胞系TE-1R;2.食管癌TE-1R細胞的增殖抑制率比TE-1細胞低,放
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