基于Allo-SCT后CMV感染特異性CD8+T細胞分離純化的實驗研究.pdf

1、目的：巨細胞病毒(Cytomegalovirus，CMV)感染是同種異體干細胞移植術(shù)后主要的并發(fā)癥和死亡原因，健康志愿者的CMV特異性CD8+T細胞過繼性免疫治療已用于該疾病的治療。保持提純后的CMV特異性CD8+T細胞的功能對實驗研究和臨床應(yīng)用均有重要意義。運用多聚體技術(shù)可以純化CMV特異性CD8+T細胞，但多聚體試劑可能改變CMV特異性CD8+T細胞的功能狀態(tài)，進而對過繼性免疫治療產(chǎn)生不利影響。鑒于上述原因，探討用于CMV特異性CD

2、8+T細胞提純的技術(shù)并檢測該技術(shù)對提純后的CD8+T細胞的功能影響至關(guān)重要。
　　方法：檢測30例HLA-A2/CMV血清陽性的健康志愿者的血標(biāo)本，選擇其中CMV特異性CD8+T細胞含量較高的標(biāo)本用于提純實驗。用多聚體技術(shù)（連鎖狀多聚體和四聚體）和MS磁柱技術(shù)從周圍血單核細胞中提純CMV特異性CD8+T細胞。隨后，運用多參數(shù)細胞免疫表型、CFSE增殖實驗和ELISPOT分析檢測提純的CMV特異性CD8+T細胞的功能，并和提純前CM

3、V特異性CD8+T細胞比較，了解多聚體技術(shù)對CMV特異性CD8+T細胞功能的影響。
　　結(jié)果：30例標(biāo)本中，CMV特異性CD8+T細胞占CD8+T細胞的百分率為0.15％～4.01％，其中16(53.3％)例超過0.5％。運用連鎖狀多聚體技術(shù)和四聚體技術(shù)提純的CMV特異性CD8+T細胞具有相似的純度。提純后，CMV特異性CD8+T細胞的純度增加30～50倍，最高達到96.79％，這些細胞表達CD8+CD45RA+CCR7-效應(yīng)T細

4、胞。培養(yǎng)8天后，分別有39.8％～45.5％經(jīng)過連鎖狀多聚體技術(shù)和四聚體技術(shù)純化的T細胞增殖。通過ELISPOT分析發(fā)現(xiàn)，無論是連鎖狀多聚體或四聚體技術(shù)分選的CMV特異性CD8+T細胞，經(jīng)過同源CD8-抗原遞增細胞和CMVpp65抗原肽刺激后均分泌IFN-γ和粒酶B，而經(jīng)過連鎖狀多聚體技術(shù)分選的CMV特異性CD8+T細胞效能更高，兩種技術(shù)均可保持CMV特異性CD8+T細胞原有的細胞活性，其中，連鎖狀多聚體技術(shù)更具有優(yōu)勢。
　　結(jié)論