酵母展示IGRP206-214H-2Kd單鏈三聚體對特異性CD8+T細胞的影響.pdf

1、1型糖尿病(Type1 diabetes mellitus，T1DM)又稱胰島素依賴型糖尿病，是由T淋巴細胞介導的對胰島β細胞破壞，導致胰島β細胞死亡的自身免疫病。CD8+細胞毒T細胞(cytotoxic T lymphocytes，CTLs)作為直接破壞者，在T1DM的發(fā)生和發(fā)展過程中具有重要作用。Ⅰ型糖尿病模型鼠（NOD小鼠）發(fā)病早期體內存在能特異性識別胰島β細胞上的葡萄糖-6-磷酸酶催化亞基相關蛋白（IGRP）抗原表位(206-2

2、14)的CD8+T細胞，并形成特異性結合的T細胞群。隨著病情的發(fā)展，IGRP特異性CTL細胞數(shù)量在發(fā)病15周達到高峰。
　　表面展示技術是以融合蛋白的形式將外源多肽展示在核糖體、病毒或細胞表面，但仍然能夠保持其相對獨立的空間結構和生物活性，從而研究多肽的性質、相互識別和作用。在蛋白質工程中，表面展示技術是一種在環(huán)境生物修復，生物催化等多方面得到應用的基因操作技術，同時還應用于疫苗和治療藥物的開發(fā)等方面。酵母是真核生物，具有折疊酶、

3、內質網(wǎng)、分子伴侶等，在蛋白質的折疊和分泌機制等方面與細菌展示技術相比更類似于哺乳動物。基于此建立起來的酵母表面展示技術可用于展示需要糖基化和二硫鍵異構化等修飾的真核生物蛋白質。本實驗室前期將MHCⅠ類分子的重鏈，β2微球蛋白(β2m)及抗原肽用接頭(linker)連接成單鏈三聚體(SCT)，通過與AGA2連接構建成IGRP206-214H-2Kd-SCT的真核載體。
　　目的:本文章通過研究酵母表面展示的IGRP206-214H-

4、2Kd單鏈三聚體對NOD小鼠CD8+T細胞的影響，從而闡明胰島細胞特異性葡萄糖-6-磷酸催化亞基相關蛋白(IGRP)導致TID發(fā)病的機理。
　　方法:本實驗室前期已成功構建真核表達型IGRP206-214H-2Kd單鏈三聚體及IGRP206-214H-2Kd單鏈三聚體的真核酵母表達載體。在此基礎上，通過篩選高表達IGRP206-214H-2Kd單鏈三聚體的酵母菌，進而研究酵母表面展示IGRP206-214H-2Kd單鏈三聚體對NO

5、D小鼠CD8+T細胞的影響。
　　結果:轉染了IGRP206-214H-2Kd單鏈三聚體的真核表達載體的酵母菌，在含2％D-半乳糖的酵母培養(yǎng)基中，20℃誘導18h，有77.1％的酵母能穩(wěn)定表達IGRP206-214H-2Kd單鏈三聚體蛋白。在體外試驗中與NOD鼠脾臟細胞共培養(yǎng)24小時CD69+表達量最高，占CD8+T細胞的1.89％;共培養(yǎng)96小時，CD25+表達量最高，占CD8+T細胞的4.25％。表明表達IGRP206-214