刺槐高效再生及轉(zhuǎn)雪花蓮凝集素（GNA）基因的研究.pdf

1、本研究以刺槐實(shí)生苗和五種基因型無刺刺槐為試材，建立了以葉片為外植體的不定芽再生體系。在此基礎(chǔ)上，通過農(nóng)桿菌介導(dǎo)法建立了刺槐實(shí)生苗和傘形槐轉(zhuǎn)雪花蓮凝集素(GNA)基因的遺傳轉(zhuǎn)化體系，并成功地獲得了轉(zhuǎn)化植株。具體研究結(jié)果如下： 1.建立了刺槐實(shí)生苗愈傷途徑高效的不定芽再生體系。其適宜愈傷誘導(dǎo)和不定芽分化的培養(yǎng)基為MS+2 mg·L<'-1> BA+5 mg·L<'-1> IBA，暗培養(yǎng)15d后轉(zhuǎn)入光下，30d其不定芽再生率高達(dá)89.

2、6％，外植體平均不定芽數(shù)目為3.3個(gè)。 2.建立了五種基因型無刺刺槐葉片直接不定芽途徑再生體系。對(duì)影響其再生的六個(gè)因素進(jìn)行了研究。結(jié)果表明：從伸展培養(yǎng)基中培養(yǎng)30d的植株上切取外植體，接種在MS附加BA和IBA的再生培養(yǎng)基上并暗培養(yǎng)14d進(jìn)行不定芽的誘導(dǎo)效果最佳。TDZ和NAA會(huì)明顯降低不定芽的誘導(dǎo)效果。不同基因型的再生能力差異明顯，再生率為4.0％～89.3％，每個(gè)外植體平均再生不定芽數(shù)為1.3～4.2個(gè)。再生率和每個(gè)外植體平

3、均再生不定芽數(shù)的相關(guān)性很高(r=0.87)。AgNO<,3>對(duì)3種基因型的葉片再生不定芽有明顯抑制作用，對(duì)另2種基因型作用不顯著。 3.通過農(nóng)桿菌介導(dǎo)法建立了實(shí)生苗和傘形槐轉(zhuǎn)雪花蓮凝集素基因(GNA)的遺傳轉(zhuǎn)化體系。采用正交設(shè)計(jì)及方差分析對(duì)影響轉(zhuǎn)化的因素進(jìn)行了優(yōu)化。實(shí)生苗和傘形槐的抗性植株再生率可分別達(dá)23.5％和21.9％。 4.對(duì)實(shí)生苗的76個(gè)抗性單株進(jìn)行檢測，其中有4個(gè)單株的DNA經(jīng)PCR擴(kuò)增出與陽性對(duì)照的相同的特