魔芋凝集素基因的克隆及表達(dá)研究.pdf_第1頁
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1、復(fù)旦大學(xué)碩士學(xué)位論文魔芋凝集素基因的克隆及表達(dá)研究姓名：費(fèi)炯申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：遺傳學(xué)指導(dǎo)教師：唐克軒2002.5.18復(fù)旦大掌碩士掌位論文一一魔芋凝泰素基因的克隆及表達(dá)研究AbstractSomeplantlectinshavebeensuccessfullyusedinthegeneticengineeringtodeveloppest—resistantorfungalresistantcrops，whichhasbeenah

2、otspotofgeneticengineeringresearchThefull—lengthcDNAofAmorphophalluskonjacagglutininorlectin(AKA)，wasclonedbytheuseofRACE—PCRtechniqueSignificantsimilarityofAKAwithlectinsfromplantspeciesofdraceaeOrchidaceaeandAmaryllida

3、ceaeatthenucleicacidsequenceanddeducedaminoacidsequencelevelwasfoundbycomparativeanalysisThecodingsequenceofthematureAmorphophalluskonjacaggtutininwasconstructedintothepETsystem(Novagen)Therecombinantvectorsweretransform

4、edintotheexpressionhoststrainsBL21andplysThetargetproteinwasproducedbytheinductionofIPTGandpurifiedItordertotestAKAsfunctionintheplants，aplantexpressingvectorpBI121MY02fortransformingdicotyledonplantswasconstructedbysubs

5、titutingthereportgene(gus)ofpBll21withthecodingsequenceofAKATheakageneandtheCaMV35SpromoterwerecutfromthepBl121一MY02andwereinsertedintothemultiplecloningsiteofpCAMBIA2300TheexpressingvectorpCAMBIA2300MY02couldbeusedtotra

6、nsformalmostallthedicot37ledonousandsomemonocotyledonousplantspeciesTherecombinantvectorwasintroducedintoAgrobacteriumtumefacienswithfreeze—thawmethodTheleafdiscsoftobaccoplantsinfectedbyAtumefacienswereselectedwithkanam

7、ycinTheregeneratedplantsweretestedbyPCR，WesternblotandSouthemblotforthepresenceandexpressionoftheintroducedakageneWesternblotresultshowedthattransgenictobaccoplantsexpressedAKAatdifferentlevelsSouthernblotanalysisfurther

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