大鼠局灶性腦缺血再灌注后缺血灶周圍區(qū)神經(jīng)細(xì)胞損傷機(jī)制及海風(fēng)藤干預(yù)作用的研究.pdf

1、缺血再灌注后神經(jīng)細(xì)胞死亡有壞死和凋亡兩種形式，其中缺血中心區(qū)主要以細(xì)胞壞死為主，是不可逆的，缺血半暗帶區(qū)主要以凋亡為主，如能及時恢復(fù)血液循環(huán)則凋亡是可逆的，所以缺血半暗帶是目前缺血性腦血管病的研究熱點(diǎn)，這一區(qū)域細(xì)胞的自發(fā)電活動和誘發(fā)電活動消失，但尚可維持細(xì)胞的膜電位及內(nèi)外離子環(huán)境的穩(wěn)定性。雖然這一區(qū)域腦組織暫時喪失了生理機(jī)能，但細(xì)胞形態(tài)的完整性未受到破壞，仍存在生機(jī)，并可誘發(fā)細(xì)胞產(chǎn)生系列反應(yīng)，部分表現(xiàn)為細(xì)胞生物信息改變，包括基因和蛋白表

2、達(dá)的改變。AIF和Caspase-3是細(xì)胞DNA損傷后非常重要的反應(yīng)蛋白，當(dāng)DNA遭受外來損傷時，以上兩種蛋白被激活而表達(dá)增加，引起染色質(zhì)的凝聚和DNA的裂解，從而導(dǎo)致細(xì)胞凋亡。本文就AIF和Caspase-3在腦缺血損傷過程中的變化以下幾個方面的探討： 研究目的 1．探討大鼠局造性腦缺血再灌注后凋亡誘導(dǎo)因子表達(dá)的時空分布規(guī)律及與神經(jīng)細(xì)胞凋亡的關(guān)系。 2．探討海風(fēng)藤提取物在缺血性腦損傷中對神經(jīng)細(xì)胞凋亡的影響。

3、 研究方法 1．應(yīng)用線栓法建立wistar大鼠大腦中動脈阻塞(MCAO)再灌注模型；同時采用TTC染色觀察梗死灶的分布。 2．應(yīng)用原位末端標(biāo)記(TUNEL)的方法觀察缺血再灌注不同時間點(diǎn)神經(jīng)細(xì)胞凋亡的出現(xiàn)和分布規(guī)律。 3．應(yīng)用免疫組化技術(shù)分別觀察腦缺血再灌注后AIF和Caspase-3的表達(dá)變化。 4．制備海風(fēng)藤提取物，觀察其對Caspase-3和AIF及神經(jīng)細(xì)胞凋亡的影響。 研究結(jié)果

4、 1.缺血后缺血側(cè)鼠腦腫脹，有明顯的梗死灶形成，TTC染色顯示正常腦組織呈紅色，梗死灶腦組織呈蒼白色。 2．TUNEL陽性染色為細(xì)胞核呈紫藍(lán)色顆粒，主要見于缺血灶周圍區(qū)，再灌注3 h開始升高，再灌注6 h、24 h后進(jìn)一步增加，72 h有所下降。 3．在不同缺血再灌注時間點(diǎn)的病灶周圍可見AIF陽性表達(dá)細(xì)胞，其時空分布規(guī)律與TUNEL陽性細(xì)胞基本一致。 4．海風(fēng)藤提取物干預(yù)后，缺血灶周圍區(qū)不同時間點(diǎn)AIF陽性細(xì)胞、