抗人DR5單抗AD5-10誘導肺癌細胞凋亡敏感性的作用及其分子機制的研究.pdf

1、AD5—10是一株新的鼠抗人死亡受體5(death receptor 5，DR5)單克隆抗體，為本實驗室在前期研究中獲得，能夠強烈誘導多種腫瘤細胞系發(fā)生凋亡，抑制小鼠體內(nèi)移植瘤的生長，對人正常肝細胞和人外周血淋巴細胞沒有明顯的誘導毒性，已成為研發(fā)生物類藥物的候選者，具有抗腫瘤作用的應用前景。但是研究發(fā)現(xiàn)，某些腫瘤細胞對AD5—10的誘導卻表現(xiàn)為明顯的抗性，其抗性是否具有一定的表現(xiàn)規(guī)律，其內(nèi)在的調(diào)控機制又是什么，仍然是目前一個有待闡明的科

2、學問題。 本論文擬選用肺癌細胞系A549、SCLC、H460、H1299和Calu—3，分析細胞表面DR5表達水平與細胞對AD5—10誘導凋亡敏感性之間的關(guān)系：并進一步尋找凋亡相關(guān)調(diào)節(jié)分子，研究其調(diào)節(jié)細胞對AD5—10誘導凋亡敏感性的內(nèi)在分子機制。本研究所選的五株肺癌細胞中，A549和SCLC細胞對AD5—10中度敏感，其他三株細胞對AD5—10不太敏感。研究表明，這五株肺癌細胞對AD5—10的敏感性與細胞中DR5的表達水平無關(guān)

3、。但發(fā)現(xiàn)，使用AD5—10處理，敏感或中度敏感細胞中，c—FLIPL發(fā)生明顯的切割，c—FLIPL的表達量顯著下降；而不太敏感或抗性的細胞中的c—FLIPL的表達水平?jīng)]有明顯變化。表明c—FLIPL是參與調(diào)節(jié)AD5—10誘導細胞凋亡的關(guān)鍵分子。 進一步研究證明，c—FLIPL過量表達可以部分抑制人T淋巴細胞白血病細胞SVT35、人肺癌細胞A549對AD5—10的敏感性；而亞毒性濃度的化療藥物環(huán)磷酰胺(CHX)、放線菌素D(Act

4、D)能通過下調(diào)細胞中c—FLIPL蛋白表達水平，增強AD5—10對肺癌細胞的殺傷活性。此外，通過c—FLIPLsiRNA特異抑制細胞中的c—FLIPL的表達，可以顯著增強多種肺癌細胞對AD5—10誘導凋亡的敏感性。其調(diào)節(jié)機制是c—FLIPLsiRNA和AD5—10能激活細胞中caspase依賴的信號通路，下調(diào)Bcl—2家族蛋白Bid和Bcl—XL的表達，進而促進線粒體膜電位的降低以及細胞色素C的釋放。并且，研究證明c—FLIPLsiRN

5、A和AD5—10聯(lián)合作用對正常人細胞沒有毒性。 最后，檢測了人肺癌組織中c—FLIPL的表達，結(jié)果顯示c—FLIPL特異高水平表達于人肺癌組織中的腫瘤細胞中，而在正常組織和腫瘤細胞周圍間質(zhì)細胞中表達量很低，兩者在統(tǒng)計學上具有顯著差異。以上研究提示特異下調(diào)c—FLIPL可能是一種非常有潛力的治療肺癌的策略，特別是針對那些對功能性單抗單獨作用產(chǎn)生抗性的腫瘤病人。 第二部分研究中，本文還利用AD5—10可變區(qū)基因，構(gòu)建了表達鼠