PCSK9siRNA抑制ox-LDL誘導(dǎo)的THP-1源性巨噬細(xì)胞炎癥因子表達(dá)與分泌.pdf

1、研究背景：
　　近年來,大量的研究表明動脈粥樣硬化是一種慢性炎癥性病理過程。動脈粥樣硬化病變中不僅含有大量的脂質(zhì),而且有大量的炎癥細(xì)胞浸潤,并以單核/巨噬細(xì)胞和淋巴細(xì)胞的集聚為特征。動脈粥樣硬化發(fā)生、發(fā)展中,這些炎癥細(xì)胞可分泌大量的炎癥因子,參與調(diào)節(jié)細(xì)胞的增殖或凋亡、細(xì)胞外基質(zhì)的合成或降解以及血管的重塑等過程。
　　PCSK9是2003年應(yīng)用生物信息學(xué)方法和DNA微陣列技術(shù)發(fā)現(xiàn)的一個與血液膽固醇代謝調(diào)節(jié)相關(guān)的基因,最近的研究

2、表明,PCSK9作為一種分泌性蛋白,除了降解LDLR,調(diào)節(jié)膽固醇代謝之外,可能還具有其他的一些生物學(xué)功能。我們前期研究發(fā)現(xiàn)PCSK9在兔動脈粥樣硬化斑塊以及THP-1源性巨噬細(xì)胞中高表達(dá),LDL和ox-LDL都可以上調(diào)PCSK9在THP-1源性巨噬細(xì)胞中的表達(dá)。靶向PCSK9的RNA干擾能有效抑制ox-LDL誘導(dǎo)的THP-1源性巨噬細(xì)胞的凋亡作用,這提示ox-LDL在巨噬細(xì)胞中的生物學(xué)效應(yīng)可以被PCSK9所影響。ox-LDL誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞

3、中炎癥因子的表達(dá)與分泌是 ox-LDL的重要生物學(xué)效應(yīng)之一,研究PCSK9是否也能干預(yù)炎癥因子的表達(dá)與分泌具有重要的科學(xué)意義。
　　目的：
　　觀察PCSK9 siRNA對ox-LDL誘導(dǎo)THP-1源性巨噬細(xì)胞分泌炎癥因子的影響,為闡明PCSK9在動脈粥樣硬化中的作用提供實(shí)驗依據(jù)。
　　材料與方法：
　　用不同濃度的ox-LDL(0,10,20,40,80μg/ml)處理經(jīng)PMA誘導(dǎo)貼壁的THP-1源性巨噬細(xì)胞不

4、同時間(0h,6h,12h,24h,48h),RT-PCR、ELISA、Western Blot分別檢測炎癥因子 IL-1α、IL-6、TNF–α以及 PCSK9 mRNA和蛋白的表達(dá)。應(yīng)用Lipofectamine2000轉(zhuǎn)染不同濃度的PCSK9 siRNA(20nmol/l,40nmol/l,80nmol/l)進(jìn)入THP-1源性巨噬細(xì)胞24h,篩選出最有效的siRNA濃度,將此濃度siRNA轉(zhuǎn)染THP-1源性巨噬細(xì)胞24h后,再加入

5、ox-LDL處理24 h,RT-PCR、ELISA、Western Blot檢測炎癥因子IL-1α、IL-6、TNF–α表達(dá)以及NF-κB核位移。
　　結(jié)果：
　　隨著ox-LDL濃度的不斷增加THP-1源性巨噬細(xì)胞炎癥因子IL-1α、IL-6及TNF–α mRNA和蛋白的表達(dá)逐漸增加,同時 RT-PCR、Western Blot檢測發(fā)現(xiàn)PCSK9 mRNA、蛋白表達(dá)均增高。PCSK9 siRNA轉(zhuǎn)染THP-1細(xì)胞后,再用o