Egr-1蛋白在心肌缺氧預適應及藥物預適應中作用的實驗研究.pdf

1、目的：缺血預適應具有強大的內源性保護作用，其發(fā)生機制尚不明確，維持細胞內鈣穩(wěn)態(tài)可能是重要機制之一。缺血再灌注損傷是一種牽涉多因素參與的復雜的病理過程，可能構成再灌注損傷多種因素的一種共同的分子基礎-早期生長反應因子(early growth response gene-1，Egr-1)，它在缺血造成組織損傷的病理過程中通過協(xié)調各種損傷因子的表達而發(fā)揮了中心調控作用，成為啟動缺血性損傷的分子開關，Egr-1還影響SERCA2a及心肌β受體

2、表達，調控細胞內鈣離子濃度。藥物可以模擬缺血預適應，產生心肌保護作用，具有積極的臨床應用前景。本實驗旨在研究大鼠心肌轉錄因子Egr-1在缺氧預適應與前胡丙素預適應中的作用及機制。
　　 方法：1.用胰蛋白酶-膠原酶聯(lián)合消化法培養(yǎng)體外原代乳鼠心肌細胞；2.用化學耗氧法模擬體內心肌缺血建立缺氧預適應和缺氧-復氧損傷模型，建立藥物預處理模型，并隨機分成5個處理組，：正常培養(yǎng)組(Control)、腺苷預處理組(AP)、缺氧預適應組(HP

3、)、藥物預處理組(PP)和缺氧-復氧損傷組(HR)。3.顯微鏡下觀察細胞搏動頻率和形態(tài)；4.用乳酸-丙酮酸法檢測細胞上清LDH值和化學比色法檢測細胞上清CK值；5.用半定量RT-PCR法檢測Egr-1的基因轉錄水平；6.用免疫應激法檢測Egr-1的蛋白表達水平。
　　 結果：1.細胞搏動頻率及形態(tài)：缺氧預適應及前胡丙素能提高缺氧復氧損傷心肌細胞搏動頻率；心肌細胞缺氧復氧培養(yǎng)后皺縮、變圓，偽足減少，HP組及PP組心肌細胞形態(tài)變化小

4、于對照組；2.與正常培養(yǎng)組比較，模擬缺氧復氧組細胞上清中LDH和CK值明顯升高(P(0.05)；與模擬缺氧復氧組比較，HP組、PP組細胞上清中LDH和CK值明顯降低(P(0.05)；但前胡丙素預處理組與缺氧預適應組之間無明顯差異(P>0.05)3.同缺氧-復氧損傷組(HR組)比較，缺氧預適應組(HP組)、腺苷預處理組(AP組)、前胡丙素預處理組(PP組)的Egr-1基因轉錄明顯降低(P<0.05)，而且AP組及HP組和PP組之間無顯著差

5、異性(P>0.05)；4.同缺氧-復氧損傷組(HR組)比較，缺氧預適應組(HP組)、腺苷預處理組(AP組)、前胡丙素預處理組(PP組)的Egr-1蛋白表達水平明顯降低(P<0.05)，而且AP組及HP組和PP組之間無顯著差異性(P>0.05)；
　　 結論：1.缺氧預適應和前胡丙素明顯改善缺氧復氧損傷的心肌細胞形態(tài)、搏動頻率，降低心肌細胞上清中LDH和CK值，對心肌細胞有一定程度的保護作用，其保護作用機制可能與前胡丙素能通過膜穩(wěn)