缺氧預適應上調心肌細胞DJ-1表達及其信號機制研究.pdf

1、目的:建立H9c2心肌樣細胞急性缺氧/復氧(A/R)損傷模型及缺氧預適應(APC)延遲保護模型,運用多種經(jīng)典、公認的生理、生化等檢測指標,在確認模型已成功的基礎上,采用RT-PCR、Western Blotting等分子生物學檢測方法來探討DJ-1的表達及變化規(guī)律,以期闡明APC所產生的延遲保護與DJ-1蛋白表達的關系,并從ERK1/2信號通路的角度初步探討APC上調DJ-1表達的信號機制。
　　 方法:采用H9c2心肌樣細胞,

2、隨機分為五組:①Control組,②U0126+Control組,③A/R組,④APC組,⑤U0126+APC組。通過RT-PCR和Western blotting技術分別檢測各實驗組中DJ-1 mRNA及蛋白的表達情況,同時用Westernblotting檢測ERK1/2蛋白的磷酸化水平；并利用MTT法檢測各實驗組的細胞存活率;按試劑盒說明測定各組細胞內LDH的活性,MDA的含量以及抗氧化物酶SOD、CAT、GSH-Px的活性；另外通

3、過流式細胞術檢測各組細胞內ROS含量變化。
　　 結果:H9c2細胞經(jīng)A/R處理后,細胞存活率明顯下降、LDH活性增加、細胞內MDA及ROS含量顯著增加,抗氧化物SOD、CAT、GSH-Px的酶活性下降,與Control組比較差異均有統(tǒng)計學意義(p<0.01),表明H9c2細胞A/R處理出現(xiàn)明顯的氧化應激損傷。而經(jīng)APC處理的H9c2細胞,24 h后可顯著提高A/R損傷細胞的存活率、降低A/R損傷細胞的LDH活性,同時降低A/R

4、損傷細胞內MDA及ROS含量、增加A/R損傷細胞內抗氧化物SOD、CAT、GSH-Px的酶活性,表明缺氧預適應能對抗A/R所誘發(fā)的氧化應激產生延遲保護。此外APC在對抗A/R所誘發(fā)的氧化應激產生延遲保護作用的同時,能促進ERK1/2蛋白磷酸化、上調DJ-1 mRNA及蛋白的表達水平,并且APC誘導DJ-1表達變化與APC延遲保護出現(xiàn)的時間窗相一致；但APC前預先給予ERK1/2抑制劑U0126,則APC上調DJ-1表達的效應被取消,同時