2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
已閱讀1頁,還剩49頁未讀, 繼續(xù)免費閱讀

下載本文檔

版權(quán)說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請進行舉報或認領(lǐng)

文檔簡介

1、目的:砷在自然界分布廣泛,毒性較強,對生物體的影響也是多方面的,在生物進化的過程中,許多生物從細菌到哺乳動物都產(chǎn)生了對抗砷毒的生理機制。我們在前期研究中已從人抗砷細胞株中篩選出了5條可能參與抗砷作用的基因。本研究選取人抗砷細胞株中表達明顯上調(diào)的3條ATP結(jié)合盒基因作為研究對象,利用RNA干擾技術(shù),體外觀察抗砷基因的沉默作用,然后通過細胞毒性實驗分析目的基因阻斷前后,抗砷細胞株抗砷性的改變,力求找到明確的抗砷基因。 方法:化學合成

2、siRNA,在siPORT<'TM>NeoFX<'TM>轉(zhuǎn)染劑的介導(dǎo)下轉(zhuǎn)染人臍靜脈內(nèi)皮細胞ECV-304細胞,用半定量RT-PCR,real time PCR和Western-blot方法檢測目的基因mRNA和蛋白水平的改變,然后通過MTT實驗分析小分子干擾RNA阻斷目的基因后,抗砷細胞株抗砷性的改變. 結(jié)果: (1)ABCAl體外合成的3條siRNA通過siPORT<'TM>NeoFX<'TM>轉(zhuǎn)染劑轉(zhuǎn)染人臍靜脈內(nèi)皮細胞ECV

3、-304細胞后,均能不同程度地抑制目的基因的表達。轉(zhuǎn)染后48h的real time PCR檢測顯示siRNA-1,siRNA-2和siRNA-3組的目的基因的表達抑制率分別為32.08%±0.746%、55.08%±0.075%、87.09%±0.031%,與陰性對照組比較均有顯著性差異(p<0.05)。其中,siRNA-3的抑制作用最強。而陰性對照siRNA組與未轉(zhuǎn)染抗砷細胞組比較,ABCA1 mRNA表達無明顯減低(p>0.05).

4、Western-blot方法檢測蛋白改變結(jié)果與PCR檢測相互一致。噻唑蘭法(MTT)進行48h NaAsO2毒性試驗后,實驗組細胞對急性砷染毒表現(xiàn)出耐受性降低,siRNA-3組在各濃度下生存率都明顯低于同步對照組。實驗組LC50為8.05 μM,對照組LC50為11.09 μM。 (2)ABCE1體外合成的2條siRNA通過siPORT<'TM>NeoFX<'TM>轉(zhuǎn)染劑轉(zhuǎn)染人臍靜脈內(nèi)皮細胞ECV-304細胞后,均能不同程度地抑

5、制目的基因的表達。轉(zhuǎn)染后48h的real time PCR檢測顯示siRNA-1,siRNA-2的目的基因的表達抑制率分別為46.6%±0.339%、73.8%±0.545%,與陰性對照組比較均有顯著性差異(p<0.05)。其中,siRNA-2的抑制作用較強。而陰性對照siRNA組與未轉(zhuǎn)染抗砷細胞組比較,ABCE1mRNA表達無明顯減低(p>0.05).Western-blot方法檢測蛋白改變結(jié)果與PCR檢測相互一致。噻唑蘭法(MTT)

6、進行48h NaAsO2毒性試驗后,實驗組細胞對急性砷染毒仍表現(xiàn)出較強的耐受性。 (3)ABCF1體外合成的3條siRNA通過siPORT<'TM>NeoFX<'TM>轉(zhuǎn)染劑轉(zhuǎn)染人臍靜脈內(nèi)皮細胞ECV-304細胞后,均能不同程度地抑制目的基因的表達。轉(zhuǎn)染后48h的real time PCR檢測顯示siRNA-1,siRNA-2和siRNA-3組的目的基因的表達抑制率分別為76.73%±0.768%、65.39%±0.699%、5

7、2.16%±0.014%,與陰性對照組比較均有顯著性差異(p<0.05)。其中,siRNA-1的抑制作用最強。而陰性對照siRNA組與未轉(zhuǎn)染抗砷細胞組比較,ABCF1 mRNA表達無明顯減低(p>0.05).Western-blot方法檢測蛋白改變結(jié)果與PCR檢測相互一致。噻唑蘭法(MTT)進行48h NaAsO2毒性試驗后,實驗組細胞對急性砷染毒仍表現(xiàn)出較強的耐受性。 結(jié)論:siRNA可特異性的抑制目的基因的表達,ABCA1基

溫馨提示

  • 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
  • 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
  • 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁內(nèi)容里面會有圖紙預(yù)覽,若沒有圖紙預(yù)覽就沒有圖紙。
  • 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
  • 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲空間,僅對用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護處理,對用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對任何下載內(nèi)容負責。
  • 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當內(nèi)容,請與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
  • 7. 本站不保證下載資源的準確性、安全性和完整性, 同時也不承擔用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。

評論

0/150

提交評論