乳腺癌遺傳易感性的研究.pdf

1、本課題對(duì)上海地區(qū)遺傳特征明顯的家族性和早發(fā)性乳腺癌患者進(jìn)行BRCAl／2基因的全面突變檢測(cè)，尋找中國(guó)人群的“特有突變”和潛在的“基礎(chǔ)突變”；同時(shí)以遺傳傾向高危的乳腺癌為研究對(duì)象開(kāi)展病例一對(duì)照研究，探討CHEK2基因和雌激素相關(guān)基因的變異與乳腺癌發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)的關(guān)系，鑒定乳腺癌遺傳易感性相關(guān)的高?；蛭稽c(diǎn)。 一、家族性和早發(fā)性乳腺癌中BRCAl和BRCA2基因的突變分析 本研究選取復(fù)旦大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院乳腺科2002年1月至200

2、4年3月無(wú)血緣關(guān)系的原發(fā)性乳腺癌病人，全部經(jīng)組織病理證實(shí)?？偣灿?2例病人入組；35例病例有至少一個(gè)一級(jí)家屬患乳腺癌的家族史，其中，20個(gè)病例來(lái)自含2個(gè)乳腺癌病人的家系，12個(gè)來(lái)自含3個(gè)乳腺癌病人的家系，3個(gè)來(lái)自含有4個(gè)乳腺癌病人的家系。37個(gè)為發(fā)病早于35歲的單純?cè)绨l(fā)性乳腺癌病例，無(wú)陽(yáng)性家族史。由靜脈血提取基因組DNA，對(duì)BRCAl／2基因的全部編碼序列進(jìn)行擴(kuò)增。突變分析由變性高效液相色譜分析(DHPLC)進(jìn)行預(yù)篩，之后進(jìn)行DNA測(cè)序

3、證實(shí)。在72例乳腺癌患者中，BRCAl基因上檢測(cè)到6個(gè)致病突變位點(diǎn)，其中4個(gè)為新發(fā)現(xiàn)的位點(diǎn)，包括2個(gè)移碼突變(3449一insA，5587-1del8)，2個(gè)拼接點(diǎn)突變(IVSl7-1G>T，IVS21+iG>C)；在檢測(cè)到的6個(gè)突變位點(diǎn)中，5587-1del8和5640delA都位于24號(hào)外顯子上的鄰近區(qū)域。BRCA2基因中發(fā)現(xiàn)有3個(gè)致病突變位點(diǎn)，2個(gè)為移碼突變一5950delCT，5802delAATT：另一個(gè)為錯(cuò)義突變(5911G

4、>C)一其可能為新的致病突變位點(diǎn)，它們都很接近地位于¨號(hào)外顯子上。另外，研究共發(fā)現(xiàn)有12個(gè)新的單核苷酸多態(tài)性(SNP)位點(diǎn)，都未引起氨基酸編碼改變；其中，8個(gè)在BRCAl基因上，4個(gè)在BRCA2基因上。在總體研究人群中，BRCAl基因的突變?yōu)?個(gè)，分布頻率為6／72=8．3％；BRCA2基因的突變?yōu)?個(gè)，分布頻率為3／72=4．2％。在早發(fā)性乳腺癌(發(fā)病年齡≤40歲)中，BRCAl基因突變頻率為12％，比BRCA2基因的4％要高；BRC

5、Al基因突變頻率在有家族史的早發(fā)性乳腺癌病人中為30．8％，明顯高于單純?cè)绨l(fā)性乳腺癌病人的5．4％(／KO．05)。在家族性乳腺癌中，BRCAl基因突變頻率為11．4％，高于BRCA2基因的2．9％。結(jié)果提示，新發(fā)現(xiàn)的BRCAl基因和BRCA2基因的突變可能是上海乳腺癌人群的特征突變；BRCAl的24號(hào)外顯子和BRCA2的¨號(hào)外顯子可能是上海中國(guó)漢族人群突變的熱點(diǎn)區(qū)域；BRCAl基因突變?cè)谶z傳傾向高危的乳腺癌中的作用比BRCA2基因大；

6、早發(fā)性特別是同時(shí)伴有家族史的病例攜帶突變的可能性大，其家屬需要進(jìn)行基因篩查；本部分的研究未發(fā)現(xiàn)上海中國(guó)人群中的“基礎(chǔ)突變”；同時(shí)，DHPLC技術(shù)作為基因篩查的可選平臺(tái)，適合大規(guī)模基因突變篩查的需要。 二、CHEK2基因變異在遺傳傾向乳腺癌遺傳易感性中的作用 研究對(duì)象來(lái)自2000年1月一2004年6月在復(fù)旦大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院診治的114例遺傳傾向高危的乳腺癌(排除BRCAl／2基因的致病性突變攜帶者)，包括家族性乳腺癌76例

7、，其中8例發(fā)病年齡低于40歲；38例單純?cè)绨l(fā)性乳腺癌(發(fā)病年齡<40歲)。正常對(duì)照組121名為無(wú)乳腺癌的健康女性，與病例按年齡頻數(shù)配對(duì)入組。研究對(duì)象均為漢族。靜脈血中抽取基因組DNA，對(duì)CHEK2基因的10一14號(hào)外顯子先進(jìn)行長(zhǎng)片段PCR擴(kuò)增，再對(duì)PCR產(chǎn)物進(jìn)行含突變的10號(hào)外顯子的擴(kuò)增，突變鑒定分析全部由DNA直接測(cè)序進(jìn)行。在研究人群和對(duì)照人群中都沒(méi)有發(fā)現(xiàn)c．¨OOdelC的突變；在3例(3／u4，2．6％)家族性乳腺癌中發(fā)現(xiàn)鄰近于1

8、lOOdelC突變位置的新的錯(cuò)義突變位點(diǎn)n11C>T(p．His371Tyr)，對(duì)照組中則無(wú)此突變發(fā)現(xiàn)。研究提示，CHEK2基因c．1lOOdelC突變可能是中國(guó)人群罕見(jiàn)的突變位點(diǎn)，在中國(guó)人乳腺癌遺傳易感性中的作用非常有限；新的變異U11C>T可能與上海地區(qū)遺傳傾向乳腺癌低度外顯的易感性有關(guān)，其功能學(xué)研究和易感關(guān)聯(lián)性需要進(jìn)一步研究確認(rèn)。 三、雌激素代謝通路相關(guān)基因與遺傳傾向乳腺癌的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)的關(guān)系 本研究對(duì)第三部分的研究對(duì)

9、象進(jìn)一步分析，共對(duì)COMT基因，ERa基因及CYPl9基因的多態(tài)性位點(diǎn)進(jìn)行了與乳腺癌遺傳易感性的關(guān)聯(lián)分析。 I．COMT基因Vall58Met多態(tài)性在遺傳傾向乳腺癌遺傳易感性的作用 本部分探討COMT基因Vall58Met(G—A)多態(tài)性在上海地區(qū)遺傳傾向高危的乳腺癌人群中的分布及其與乳腺癌發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)的相關(guān)性。對(duì)U4例遺傳傾向高危的家族性／早發(fā)性乳腺癌患者(排除BRCAl／2基因的致病性突變攜帶者)和12l例無(wú)乳腺癌健康對(duì)

10、照者進(jìn)行COMT基因4號(hào)外顯子的聚合酶鏈反應(yīng)PCR擴(kuò)增，隨后進(jìn)行DNA直接測(cè)序鑒定Vall58Met多態(tài)的基因型，比較基因型分布和發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)的關(guān)系；危險(xiǎn)度OR及95％CI應(yīng)用非條件Logistic回歸分析計(jì)算。結(jié)果共n2例病例和110例對(duì)照PCR成功并進(jìn)行測(cè)序，COMT基因Vall58Met多態(tài)的GG，GA，從基因型在病例組中的分布頻率分別為65(58．1％)，36(32．1％)，n(9．8％)；在對(duì)照組的分布頻率分別為66(60．0％)

11、，41(37．3％)，3(2．7％)。在早發(fā)性乳腺癌(發(fā)病年齡<40歲)人群中，含A基因型的頻率為21(56．8％)，顯著地高于家族性乳腺癌的26(34．7％)，(P=-O．026)。以GG基因型為參照，從基因型(158Met)顯著性地提高乳腺癌的發(fā)病危險(xiǎn)(校iEOR=3．15；95％CI：0．70一M．19)，P=-O．039；其中尤以絕經(jīng)前女性為明顯(校[EOR=9．98；95％CI：1．00-99．64)，P=-O．004；在身體

12、質(zhì)量指數(shù)BMl423的婦女中，從基因型(158Met)臨界顯著性地提高乳腺癌的發(fā)病危險(xiǎn)達(dá)7．57倍(95％CI：O．57-101．28)，P=-O．056。研究表明，COMT基因Vall58Met多態(tài)性在中國(guó)漢族人群中的分布有別于其他種族，有其自身的分布特點(diǎn)；158Met可能與上海地區(qū)中國(guó)漢族人群乳腺癌，特別是絕經(jīng)前或早發(fā)性乳腺癌的遺傳易感性有關(guān)，可作為低外顯率的乳腺癌易感基因位點(diǎn)，值得進(jìn)一步評(píng)估作為未來(lái)臨床基因篩查候選指標(biāo)的可能性。

13、 II．ER-口基因多態(tài)性在遺傳傾向乳腺癌遺傳易感性中的作用 雌激素通過(guò)結(jié)合雌激素受體發(fā)揮對(duì)靶器官的效應(yīng)，ER-口基因調(diào)控雌激素受體的表達(dá)，在乳腺癌的發(fā)生發(fā)展中起重要作用。本部分探討ER-口基因PvuII和XbaI多態(tài)性在上海地區(qū)遺傳傾向高危的乳腺癌人群中的分布及其與乳腺癌發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)的相關(guān)性。對(duì)“4例家族性／早發(fā)性乳腺癌患者(排除BRCAl／2基因的致病性突變攜帶者)和121例無(wú)乳腺癌健康對(duì)照者進(jìn)行ER-口基因2號(hào)內(nèi)含子的聚

14、合酶鏈反應(yīng)PCR擴(kuò)增，隨后進(jìn)行DNA直接測(cè)序鑒定PvuII和XbaI多態(tài)性的基因型，比較基因型分布和發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)的關(guān)系；危險(xiǎn)度OR及95％CI應(yīng)用非條件Logistic回歸分析計(jì)算。共113例病例和對(duì)照成功進(jìn)行測(cè)序，ER-口基因PvuII多態(tài)性的CC，CT，TT基因型在病例組中的分布頻率分別為16(14．2％)，58(5L3％)，39(34．5％)；XbaI多態(tài)性從，AG，∞基因型在病例組中的分布頻率分別為76(67．2％)，34(30．1

15、％)，3(2．7％)。分別以CC基因型和M基因型為參照，在總體人群中，PvuII和XbaI多態(tài)與乳腺癌無(wú)明顯關(guān)聯(lián)；但在絕經(jīng)前女性中，PvuII多態(tài)的C/T基因型提高乳腺癌發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)達(dá)2．1倍，P=-O．O44；XbaI多態(tài)的∞基因型攜帶者患乳腺癌發(fā)病危險(xiǎn)降低達(dá)9倍(校iEOR=O．11，P=-O．O58)?；蛐偷穆?lián)合分析表明，以CC+GG基因型相比，同時(shí)攜帶PvuIICT和XbaI從基因型的絕經(jīng)前女性患乳腺癌的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)顯著增加達(dá)11倍(