人端粒酶催化亞單位基因的表達及其多克隆抗體的制備.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、　　人端粒酶催化亞單位是人端粒酶各組分中唯一在腫瘤組織中表達而在正常組織中不表達的亞基。鑒于端粒酶的激活和腫瘤密切相關(guān)，而hTERT基因的表達又是端粒酶激活系列反應(yīng)中的限速步驟，因此hTERT基因的表達可以作為腫瘤的平行標(biāo)志而應(yīng)用于腫瘤的檢測和診斷?！　”疚慕柚肿由飳W(xué)軟件列出hTERT上9mer肽段與HLA-A2.1分子分離的半數(shù)時間，該時間越長則意味著該肽段在抗原、HLA和細胞毒性T細胞三者的相互作用中意義越大。據(jù)此選取了半數(shù)時

2、間最長的540ILAKFLHWL548、555ELLRSFFYV5632個肽段作為主要腫瘤相關(guān)抗原。通過PCR擴增了含有以上肽段編碼序列的一段hTERT基因，嘗試在畢赤酵母和大腸桿菌中進行重組表達，并在大腸桿菌中獲得了成功表達。在大腸桿菌表達系統(tǒng)中，將hTERT基因克隆至表達載體pGEX-4T-1中，構(gòu)建了重組表達質(zhì)粒pGEX-hTERT，轉(zhuǎn)化至大腸桿菌BL21(DE3)菌株中，并篩選出穩(wěn)定表達的工程菌。超聲后SDS-PAGE分析，表達

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