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1、端粒酶催化亞單位(TERT)分子是腫瘤細(xì)胞發(fā)生惡性轉(zhuǎn)化過(guò)程中起重要作用的分子,在不同類型的腫瘤組織中廣泛表達(dá),而人體正常組織中通常不表達(dá).將TERT作為"通用腫瘤抗原"的腫瘤免疫治療策略是很有前景的一種免疫治療方法.在我們的實(shí)驗(yàn)中,我們通過(guò)RT-PCR擴(kuò)增得到了小鼠的TERT分子,將其克隆入穿梭質(zhì)粒載體shuttle-CMV中得到shuttle-T.再用Pme I限制酶將shuttle-T酶切線性化,與超螺旋的骨架質(zhì)粒AdEasy-2經(jīng)
2、過(guò)電穿孔共轉(zhuǎn)化重組酶陽(yáng)性(recA+)的宿主大腸桿菌BJ5183.經(jīng)過(guò)抗生素篩選,酶切鑒定獲得了同源重組后的腺病毒質(zhì)粒.將此腺病毒質(zhì)粒用PacI酶切后,用脂質(zhì)體(Lipofectamine)包裹轉(zhuǎn)染入整合了腺病毒E4區(qū)的人胚腎細(xì)胞株293E4.約10天后得到包裝的重組腺病毒,命名為AdT.此重組腺病毒經(jīng)過(guò)PCR,western blot及電鏡觀察均得到證實(shí).為使TERT分子有效靶向進(jìn)入體內(nèi)樹突狀(DC)細(xì)胞,我們將所得到的AdT與甘露聚
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