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文檔簡介
1、目的:本研究擬觀察臨床相關濃度的異丙酚對缺氧復氧損傷后大鼠海馬神經(jīng)元形態(tài)、MTT及線粒體膜電位的變化,進一步探討異丙酚對腦再灌注損傷的保護作用及機制。從而指導臨床合理用藥,為異丙酚在臨床上的進一步應用提供理論依據(jù)。 方法:1.孕17~18天的胎鼠海馬神經(jīng)元原代培養(yǎng);2.實驗分組:將培養(yǎng)6-7天的胎鼠海馬細胞分為正常對照組(C),缺氧復氧模型(M)組和異丙酚(P)組;后兩組分別于復氧0h,4h,8h,12h,24h小時取樣進行試驗
2、(各時間點分別標記為T1,T2,T3,T4,T5)。3.倒置相差顯微鏡下觀察各組各時間點海馬神經(jīng)元結(jié)構(gòu)的變化。4.采用MTT法評價異丙酚對大鼠海馬神經(jīng)元存活率和線粒體功能的影響。5。以Rh123為熒光探針標記大鼠海馬神經(jīng)元線粒體,用流式細胞儀對線粒體膜電位(MMP)進行定量分析,激光共聚焦顯微鏡對線粒體膜電位進行定性觀察。 結(jié)果:1.原代培養(yǎng)的大鼠海馬神經(jīng)元,形態(tài)活性良好。2.模型組神經(jīng)元胞體內(nèi)出現(xiàn)空泡,軸突斷裂,出現(xiàn)碎片。異丙
3、酚組神經(jīng)元輕微腫脹,個別神經(jīng)元胞體內(nèi)出現(xiàn)空泡,受損傷細胞比例較模型組低。3.MTT法顯示:在復氧0-12小時中的各時間點異丙酚組細胞存活率均顯著大于模型組(P<0.05),而在復氧24小時,模型組和異丙酚組的細胞存活率已無顯著性差異。4.流式細胞儀檢測結(jié)果顯示:正常培養(yǎng)組的平均熒光強度值為353.84,缺氧2小時后兩組的平均熒光強度值都有了明顯下降,模型組為224.09,異丙酚組為264.60。異丙酚組明顯高于模型組。復氧4-24小時各
4、時間點兩組海馬神經(jīng)元線粒體膜電位的平均熒光強度值均勻下降,但同一時間點的異丙酚組均明顯高于模型組。激光共聚焦顯微鏡掃描結(jié)果顯示:模型組復氧各時間段的神經(jīng)元,隨著時間的延長,綠色熒光逐漸變暗,數(shù)量減少,紅染細胞逐漸增多。尤其是復氧0小時,和復氧24小時的圖像變化最為明顯。而在異丙酚組這種變化較為緩和。 結(jié)論:1.細胞凋亡線粒體膜電位的變化早在缺氧2h即出現(xiàn)變化,因而可作為細胞凋亡的早期檢測指標。2.異丙酚能夠增加海馬神經(jīng)元缺血再灌
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