臍血漿活性成分分析及其對(duì)臍血CD34+細(xì)胞增殖的影響.pdf

1、研究背景與目的：
　　 目前已經(jīng)有大量實(shí)驗(yàn)證實(shí)臍帶血造血干細(xì)胞比骨髓中和外周血來源的動(dòng)員的造血干細(xì)胞更具有自我更新、增殖分化和體外擴(kuò)增潛能,廣泛應(yīng)用于干細(xì)胞移植以及其它臨床治療中。CD34+是造血干細(xì)胞的重要標(biāo)志物,是最常用的分離造血干細(xì)胞的標(biāo)志。CD34+造血干細(xì)胞在骨髓和臍帶血中含量相對(duì)較高,具有較強(qiáng)的自我更新和分化能力。而臍血漿是臍血干細(xì)胞增殖的天然微環(huán)境,其中的活性成分已經(jīng)引起廣泛的關(guān)注,文獻(xiàn)已有報(bào)道,臍血漿能顯著促進(jìn)血

2、細(xì)胞克隆形成和細(xì)胞增殖,也發(fā)現(xiàn)其血漿中含有干細(xì)胞因子(SCF)和粒細(xì)胞集落刺激因子(GM—CSF),但對(duì)臍血漿中活性蛋白成分的了解仍不全面。
　　 生物芯片是20世紀(jì)90年代初發(fā)展起來的一種全新的微量分析技術(shù),目前常見分類主要是三大類:基因芯片、蛋白芯片、芯片實(shí)驗(yàn)室。蛋白芯片集高通量、高速度、高質(zhì)量和自動(dòng)化等特點(diǎn)于一身,這是目前使用的其他檢測(cè)方法望塵莫及的[1]。
　　 為對(duì)臍血漿中的活性蛋白成分有較全面的了解,本研究利

3、用蛋白芯片技術(shù),分析臍血漿中的活性成分,并觀察其對(duì)CD34+造血干細(xì)胞的增殖分化的影響,為相關(guān)細(xì)胞生物學(xué)臨床應(yīng)用打下基礎(chǔ)。
　　 方法：
　　 本研究將采用蛋白芯片技術(shù)對(duì)臍血漿和健康青年女性靜脈血漿活性成分進(jìn)行對(duì)比分析,用Gene Pix Pro4.0軟件進(jìn)行人臍血漿和靜脈血漿兩個(gè)樣本的蛋白含量差異性分析。用MiniMACS免疫磁珠從臍血中分選出CD34+細(xì)胞,在CD34+細(xì)胞培養(yǎng)液中中加入臍血漿,顯微鏡下觀察并計(jì)數(shù)CD

4、34+細(xì)胞增殖能力。統(tǒng)計(jì)學(xué)分析:采用SPSS10.0軟件進(jìn)行分析,t檢驗(yàn),P<0.05為有顯著性差異。
　　 結(jié)果：
　　 1、臍血漿中有多種蛋白分子的含量顯著高于靜脈血漿,包括SCF、IL-20、IL-12、IL-3、FGF-4、BMP-2、BMP-7、IGF-1、IL-4、Frizzled-3、RAGE、CRIM-1、Neuritin、Neuropilin-2、Neurturin、SFRP-3、Tomoregulin