Graves病易感位點的篩查和功能初探.pdf

1、Graves病是一種常見的多基因疾病，在中國它的發(fā)病率約0.25-1.09％，是最常見的自身免疫疾病之一。Graves病的發(fā)生是由基因和環(huán)境因素的共同影響所造成的，可能有多個基因參與了對疾病的貢獻，并且環(huán)境因素在其中也起了很大的作用，因此發(fā)病機理比較復(fù)雜。通過連鎖分析，人們發(fā)現(xiàn)了許多與Graves病可能相關(guān)的染色體易感區(qū)段，其中位于5q31區(qū)段的結(jié)果同時得到了中國和日本研究小組的確認，因此在這一區(qū)域很可能包含一個至少在東亞人群中比較特異

2、的易感位點。 在5q31區(qū)域Lod值最高的Marker D5S2090附近的3.0MBK區(qū)域，我們按照每100Kb選擇一個SNP的方法，尋找易感位點。在總共選擇的29個SNP中，有兩個有統(tǒng)計學(xué)差異，其中rsl368408處的P值達到8.74 X 10<'-9>。接下來我們將關(guān)注的目光進一步縮小到rsl368408附近的1.OMB區(qū)域。我們將這一區(qū)段包含的全部11個基因的外顯子和啟動子區(qū)進行全測序，共發(fā)現(xiàn)了52個SNP位點；同時對

3、于基因間的區(qū)域，按照每5KB一個SNP位點的原則從NCB工的dbSNP數(shù)據(jù)庫共選擇了39個SNP位點。將這1.0MB區(qū)域內(nèi)選擇的全部91個SNP，采用MassArray Sequenom技術(shù)，對從山東和上海地區(qū)采集的兩組人群進行測序。通過病例對照分析，發(fā)現(xiàn)在山東人群中一共有22個SNP位點有統(tǒng)計學(xué)差異，并且差異位點最多且統(tǒng)計學(xué)意義最明顯的位點都位于UGRPl基因上，其中位于啟動子區(qū)的P2位點有最顯著的P值(P=1.37×10<'-8>)

4、。上海人群中雖然有統(tǒng)計學(xué)差異的位點數(shù)目少于山東人群，但整體趨勢很相似，且統(tǒng)計學(xué)差異最顯著的位點也是位于UGRPl的P2位點。接下來，我們對兩組人群UGRPl基因的9個SNP位點組成的單倍型進行了分析，結(jié)果顯示包含啟動子區(qū)P1+P2或P1+P3兩個SNP組成的單倍型統(tǒng)計學(xué)差異最明顯。 通過構(gòu)建包含P1+P2、P1+P3單倍型以及啟動子區(qū)不含SNP位點變化的正常序列的報告基因質(zhì)粒，我們通過熒光素酶試驗發(fā)現(xiàn)：相對于正常的啟動子序列，

5、啟動子區(qū)含有單倍型改變的UGRP基因轉(zhuǎn)錄水平明顯下降。此外我們還收集了93例正常人的甲狀腺組織，通過Real-timePCR證實了在體內(nèi)也有同樣的情況存在。Northern blot和RT-PCR試驗顯示UGRPl基因的受體在很多免疫相關(guān)的組織都有表達，這進一步提示我們UGRPl可能與Gralves病這種自身免疫疾病有很強的相關(guān)性。最后，我們還對啟動子區(qū)含有單倍型改變以及不含SNP改變的Graves病人組織標本做了基因芯片分析，希望對我