家蠶二分濃核病毒感染的家蠶連續(xù)病理變化研究.pdf

1、家蠶二分濃核病毒（Bombyx mori bidensovirus, BmBDV）是二分DNA病毒科（Bidnaviridae），二分濃核病毒屬（Bidensovirus）的代表種，也是目前發(fā)現(xiàn)的唯一一株動(dòng)物二分體病毒。該病毒為單鏈線性的DNA病毒，基因組含有兩個(gè)節(jié)段VD1（6.5 kb）和VD2(6.0 kb)。其病毒粒子呈二十面體對(duì)稱結(jié)構(gòu)，無(wú)囊膜包被，直徑約為20-24 nm。BmBDV是導(dǎo)致家蠶罹患濃核病的一種病原體，對(duì)家蠶具有致

2、死性，給蠶業(yè)造成了一定的損失。該病毒具有高度的宿主和組織特異性，僅感染家蠶幼蟲(chóng)的中腸上皮細(xì)胞，致使其細(xì)胞核異常膨大。感病的家蠶表現(xiàn)出典型的濃核病病癥，如運(yùn)動(dòng)遲緩、厭食、生長(zhǎng)延緩、下痢等。盡管BmBDV引發(fā)的病理變化在此之前已有很多相關(guān)報(bào)道，但這些研究都是分散的，不完整的，甚至有些描述是模糊的、不準(zhǔn)確的，家蠶連續(xù)的病理變化還未被系統(tǒng)的分析。
　　本文主要運(yùn)用生物統(tǒng)計(jì)學(xué)，組織病理切片和實(shí)時(shí)熒光定量PCR等技術(shù)，從個(gè)體，組織及分子三個(gè)水

3、平對(duì)BmBDV引起的家蠶的連續(xù)病理變化進(jìn)行了詳細(xì)的研究。
　　在個(gè)體水平上，BmBDV的感染會(huì)導(dǎo)致家蠶生長(zhǎng)延緩，齡期延長(zhǎng)，發(fā)育不良，最終因生長(zhǎng)發(fā)育停滯而死亡，BmBDV對(duì)家蠶的半數(shù)致死時(shí)間約21天。被病毒感染的幼蟲(chóng)排泄出串珠狀蠶沙，其后部中腸變黃變薄。不同發(fā)育階段的家蠶幼蟲(chóng)對(duì) BmBDV的敏感性并沒(méi)有差異。4齡初被病毒感染的幼蟲(chóng)，從感染后第三天（3 dpi），生長(zhǎng)開(kāi)始落后于健康幼蟲(chóng)，10 dpi后，家蠶的生長(zhǎng)停滯。5齡幼蟲(chóng)被病毒感

4、染后仍能吐絲結(jié)繭，但是繭重約減少了4.9％，蛹的重量降低了17.9%，蛹的存活率也降低了5%。進(jìn)一步研究表明BmBDV不能垂直傳播給后代。
　　在組織水平上，從2 dpi有少數(shù)柱狀上皮細(xì)胞核開(kāi)始膨大，蛻皮后第1天（5 dpi），核膨大的細(xì)胞消失，到8 dpi幾乎所有的柱狀上皮細(xì)胞核膨大。從4 dpi，腸腔中能看到退化脫落的細(xì)胞核。隨著被感染的柱狀細(xì)胞不斷的脫落，到10 dpi幾乎看不到柱狀細(xì)胞，這時(shí)杯狀細(xì)胞核開(kāi)始膨大，在第13 d

5、pi時(shí)杯狀細(xì)胞的病變最為嚴(yán)重，此時(shí)杯泡消失，整個(gè)細(xì)胞被膨大的核占據(jù)。說(shuō)明在感染晚期，杯狀細(xì)胞也會(huì)被感染。病理切片的免疫組化分析進(jìn)一步表明，中腸上皮細(xì)胞核膨大是由BmBDV的繁殖引起的。
　　在分子水平上，病毒從被攝入到子代病毒被釋放的整個(gè)感染周期大約是60 h。病毒基因的表達(dá)分析顯示，病毒基因從2 dpi開(kāi)始大量表達(dá)，7-9 dpi表達(dá)量最高，隨后顯著降低。到13 dpi后基因表達(dá)有所回升，說(shuō)明感染晚期病毒在杯狀細(xì)胞中繁殖。

6、>　　BmBDV引起的家蠶的病變?cè)诜肿铀?，組織水平和個(gè)體水平間表現(xiàn)出了密切的聯(lián)系。病毒在中腸細(xì)胞內(nèi)的繁殖，導(dǎo)致了中腸組織的病變，從而影響了其對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的消化吸收功能，致使家蠶營(yíng)養(yǎng)不良，生長(zhǎng)延緩，直至家蠶生長(zhǎng)停滯，從而逐漸死亡。BmBDV基因在第2 dpi大量轉(zhuǎn)錄，此時(shí)中腸柱狀細(xì)胞核開(kāi)始膨大，致使從第3 dpi開(kāi)始家蠶的生長(zhǎng)減緩。個(gè)體的蛻皮過(guò)程，使得中腸細(xì)胞更替，核膨大細(xì)胞消失，也影響了病毒基因的轉(zhuǎn)錄。在第10 dpi，病變柱狀細(xì)胞完全

7、脫落，病毒沒(méi)有了繁殖的宿主細(xì)胞從而轉(zhuǎn)錄降到極低水平，個(gè)體生長(zhǎng)也在此時(shí)停滯，并伴隨有大量的串珠狀蠶沙的產(chǎn)生。后期病毒基因轉(zhuǎn)錄的短暫回升是感染了杯狀細(xì)胞的結(jié)果，導(dǎo)致了杯狀細(xì)胞的核膨大。這充分說(shuō)明，分子病變是組織病變和個(gè)體病變的根源所在，分子水平上的病理變化也要早于組織和分子的病變。
　　同時(shí)我們還建立了一種 BmBDV的快速分子診斷體系。以蠶沙為材料的病原檢測(cè)，免去了普通分子診斷提取RNA或DNA的繁瑣過(guò)程，實(shí)現(xiàn)了對(duì)BmBDV感染的快