山東省畜禽源性魏氏梭菌毒素型Multi-PCR調(diào)查.pdf

1、 為搞清楚山東省魏氏梭菌毒素型真實(shí)分布情況，建立了Multi-PCR檢測方法，對近5年內(nèi)本省流行過該病的德州、泰安、棗莊等地的24個(gè)養(yǎng)殖場采集的692個(gè)樣品進(jìn)行了檢測，共分離到124株魏氏梭菌，檢出率為17.9﹪；經(jīng)Multi-PCR檢測均為A型。本研究共分四部分：第一部分：魏氏梭菌的分離和初步鑒定將采集的糞便樣品分別無菌稱取5g稀釋到50ml營養(yǎng)肉湯中，置于厭氧培養(yǎng)箱中43℃增菌18h，然后取出按“三線分離法”接種到血培養(yǎng)基上，

2、43℃厭氧培養(yǎng)12h，可見圓形、突起、邊緣整齊、表面濕潤、光滑、雙溶血環(huán)微綠的菌落。然后將菌落涂片，染色，鏡檢，同時(shí)對照在有氧環(huán)境中培養(yǎng)無菌落生長。第二部分：魏氏梭菌的PCR快速診斷方法的建立及應(yīng)用建立了聚合酶鏈?zhǔn)戏磻?yīng)魏氏梭菌α毒素基因的檢測方法，通過不斷摸索條件優(yōu)化了試劑使用劑量，縮短了反應(yīng)時(shí)間，第三部分：魏氏梭菌Multi-PCR檢測方法建立及在空氣樣品檢測上的應(yīng)用根據(jù)GenBank上發(fā)表的序列設(shè)計(jì)了四對引物，通過不斷優(yōu)化反應(yīng)條件，